[发明专利]人源化ACE2基因改造小鼠胚胎干细胞模型制备方法及应用

权利要求书

1.一种sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。

2.如权利要求1所述的sgRNA，其特征在于，合成如SEQ ID NO:2所述sgRNA的上下游引物序列分别如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示。

3.如权利要求1所述的sgRNA，其特征在于，合成如SEQ ID NO:1所述sgRNA的上下游引物序列分别如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示。

4.如权利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA靶向的基因为动物ACE2基因，用于定点切割ACE2基因。

5.如权利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA用于构建人源化动物模型。

6.如权利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的靶点位于所述的动物ACE2基因1号外显子。

7.如权利要求6所述的sgRNA，其特征在于，所述靶点处于所述的动物ACE2基因5’UTR后140bp碱基范围内。

8.如权利要求4-7任一所述的sgRNA，其特征在于，所述动物为哺乳动物。

9.如权利要求8所述的sgRNA，其特征在于，所述哺乳动物为啮齿类动物。

10.如权利要求9所述的sgRNA，其特征在于，所述啮齿类动物为鼠。

11.一种载体组合，其特征在于，所述载体组合包含：（1）含有如权利要求1-10任一所述的sgRNA的载体；（2）靶向载体，所述靶向载体包含5’同源臂、人源ACE2基因片段、SV40polyA序列和3’同源臂；所述的靶向载体靶向动物ACE2基因，所述动物ACE2基因含有与权利要求1-10任一所述的sgRNA相对应的靶点。

12.如权利要求11所述的载体组合，其特征在于，所述5’同源臂为与在目标基因组基因座处的5’靶序列同源的5’同源臂。

13.如权利要求12所述的载体组合，其特征在于，所述靶向载体用于将人源基因的CDS序列插入到动物基因的启动子和5’UTR区域序列后，利用动物目的基因启动子启动人目的基因表达。

14.如权利要求12所述的载体组合，其特征在于，所述3’同源臂为与在目标基因组基因座处的3’靶序列同源的3’同源臂。

15.如权利要求14所述的载体组合，其特征在于，所述靶向载体还包含筛选标志PGK-Puro 。

16.如权利要求11所述的载体组合，其特征在于，所述动物为哺乳动物。

17.如权利要求16所述的载体组合，其特征在于，所述哺乳动物为啮齿类动物。

18.如权利要求13所述的载体组合，其特征在于，所述动物为鼠。

19.一种编码权利要求1-10任一所述的sgRNA的DNA分子。

20.一种细胞，其特征在于，包含权利要求1-10任一所述的sgRNA或权利要求11-18任一所述的靶向载体或权利要求19所述的DNA分子，所述细胞不能发育为动物个体，所述细胞不包括生殖细胞。