[发明专利]犬腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种犬腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用。所述疫苗包含融合蛋白以及医药学上可接受的载剂，所述融合蛋白具有SEQ ID NO:2所示序列。本发明提供的所述疫苗安全性高，免疫原性好，能够在动物体内产生较强的体液免疫，免疫后的动物能够抵御强毒攻毒，并且还可以使用生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，具有质控容易、批次间稳定、生产成本低等优点。

技术领域

本发明涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种犬腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用，属于动物免疫药物技术领域。

背景技术

犬腺病毒（Canine Adenovirus，CAV）感染引起的传染性疾病称为犬腺病毒病（Canine Adeno，CA）。CA是对包括犬在内的多种哺乳动物的一种致病性强、感染范围广、高度接触性传染病。CAV常与犬瘟热病毒（CDV）、犬细小病毒（CPV）、犬副流感病毒（CPIV）等混合感染，增加了临床症状的复杂性。根据血凝抑制作用和中和作用的不同，CAV分为犬I型腺病毒（Canine adenovirus type l，CAV-1）和犬II型腺病毒（Canine adenovirus type 2，CAV-2）两个血清型。CAV-1能引起以传染性犬肝炎和狐狸脑炎为特征的全身性感染，且能导致眼睛损伤，能感染犬、狐、狼、貉、黑熊、负鼠和臭鼬等动物，临床表现为嗜睡、体重减轻、肠炎、肝炎、肺炎、弥漫性血管内凝血及猝死等。CAV-2的感染与传染性喉气管炎、肠炎都有关，可感染犬、猫和猪等多种哺乳动物，临床表现为持续高热、流鼻涕、眼角出现眼屎、咳嗽、扁桃体炎、肺炎和喉气管炎等。在我国CAV感染十分普遍，其中犬不分品种、年龄和性别均可发生，大大增加了人类感染动物源性疾病的潜在风险。

CAV属腺病毒科哺乳动物腺病毒属，为双股线状DNA病毒。CAV-1基因组全长约为31kb左右，CAV-2基因组全长约为32.2kb左右，两者同源性约为70％左右，基因水平仅约有56.6％的相关性。CAV基因组包含E1～E4基因和L1～L5基因，共编码15种多肽，其中占总蛋白量90％以上的最主要的结构性蛋白包括五邻体、六邻体、纤突和核衣壳蛋白。六邻体是CAV的主要抗原蛋白，含有型特异性抗原表位和中和抗原表位，能刺激机体产生中和抗体以及组合型特异性抗体。纤突的远端部分为腺病毒型特异性抗原，纤突的基部为亚群特异性抗原。纤突顶端为一个4nm直径的球形物（又叫knob），这是病毒感染细胞时结合于细胞受体的部分，血凝素也在球部，CAV-1和CAV-2在血凝方面的差别和纤突结构有关，在和红细胞发生凝集时，两者可能使用不同的或不完全相同的RBC表面受体。纤突蛋白和某些非结构蛋白均系糖基化蛋白。另外纤突蛋白可阻断腺病毒大分子合成，抑制毒增殖。

疫苗免疫是控制CAV传播的有效措施之一。近几年我国新研制并批准了多个不同毒株生产的CAV相关兽用弱毒活疫苗。其中，CAV-1弱毒苗的使用大大减少了犬传染性肝炎的发病数量，但该疫苗免疫后会引起犬的蓝眼病，并且犬的排泄物中依旧带毒，该弱毒经犬传代后有返强的可能，因此存在一定局限性。而CAV-2弱毒苗虽然能够对CAV-1提供交叉保护，但疫苗中所含毒株均为弱毒株，免疫动物后存在散毒的风险，且免疫后需要一段时间才能产生抗体，不能快速建立对病毒的抵抗能力。

鉴于此，业界亟需发展出一种高效安全的CAV基因工程亚单位疫苗。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种犬腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用，以克服现有技术中的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种融合蛋白，其具有SEQ ID NO:2所示序列或者与SEQ IDNO:2的全长序列95％以上相同的序列。即，本发明实施例提供的融合蛋白的氨基酸序列可以是原始序列，增加或截短的序列。

本发明实施例还提供了用于编码所述融合蛋白的编码基因。

在一些实施方式中，所述的编码基因具有SEQ ID NO:1所示序列或者与SEQ IDNO:1的全长序列95％以上相同的序列。