[发明专利]一种预测神经退行性疾病风险的试剂盒及其用途

说明书

本申请公开了用于预测和/或诊断受试者是否患有神经退行性疾病的方法，以及用于所述方法的试剂盒。此外，本申请还公开了试剂盒用于预测受试者发生神经退行性疾病的风险的用途。本申请的试剂盒能够检测无症状期的AD，甚至能够在AD发病前5‑7年对受试者患AD的风险进行预测。

技术领域

本申请涉及医药领域、病毒学领域和免疫学领域，特别是免疫学诊断领域。本申请具体涉及一种用于预测受试者发生神经退行性疾病的风险的试剂盒，以及用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂在制备试剂盒中的用途。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)对全世界的医疗系统构成了巨大挑战，但是目前药物临床试验均宣告失败，这可能与AD的病理变化在AD症状出现前数年就已发生有关。因此，在AD出现症状前进行早期干预可能是更好方法。但由于缺乏症状或症状较轻，临床前AD很难识别。因此，生物标志物成为其鉴定的重要工具。但传统的腰椎穿刺检查脑脊液中的Aβ及tau为侵入性检查且成本昂贵，难以在临床实践中普遍应用。

外泌体是直径为30-100nm的纳米囊泡，可以从大多数活细胞中释放出来，且易于穿过血脑屏障。从血清中分离出的外泌体已被证明富含miRNA，更重要的是，许多miRNA是外泌体特异性的。因此，外泌体miRNA可能能够提供有关中枢神经系统病理变化的信息。miRNA水平的变化可能导致异常翻译，从而导致相应蛋白质表达异常。越来越多的证据表明miRNA与AD病理相关。miRNA调节淀粉样前体蛋白(APP)和与APP代谢相关的蛋白，例如α-分泌酶和β-分泌酶的表达。它们在淀粉样蛋白β(Aβ)清除中也起重要作用。另外，miRNA水平与脑中Tau蛋白的表达和磷酸化有关，并参与其他与AD相关的机制，例如线粒体功能障碍，自噬，神经递质释放、清除和突触可塑性等。其他研究报道，外泌体miRNA可能是AD的生物标志物。然而，很少有研究调查在临床前AD中外泌体miRNA水平是否发生改变，以及miRNA是否可以作为该疾病的预测生物标志物。

基于上述问题，AD的临床治疗急需一种能够有效诊断无症状期AD的方法。

发明内容

本申请发明人通过检测外周血神经元源性外泌体中6种microRNA(miRNA)的水平，建立了无症状期AD的诊断模型，并在4个独立的人群中验证了6种miRNA组合的诊断效力，证实了外泌体中miRNA对AD临床前阶段的预测作用，可在AD症状出现前的至少5年(例如5-7年)进行预测和诊断。

因此，在第一方面，本申请提供了一种用于预测受试者发生神经退行性疾病的风险的方法，其包括：

(1)从受试者获得包含生物标志物的生物样品；

(2)测定生物样品中生物标志物的水平；和

(3)基于所述生物标志物的水平，预测受试者发生神经退行性疾病的风险；

其中，所述生物标志物为miR-29c-5p，miR-143-3p，miR-335-5p，miR-485-5p，miR-138-5p和miR-342-3p。

在某些实施方案中，所述生物样品选自全血，血清，血浆或脑脊液。

在某些实施方案中，所述生物样品选自全血，血清和血浆。在此类实施方案中，优选地，在进行步骤(2)之前，对所述生物样品进行预处理，以获得外泌体；然后进行步骤(2)，即，测定外泌体中生物标志物的水平。对生物样品(例如全血，血清和血浆)进行处理以获得外泌体的方法是本领域技术人员已知的。例如，可使用商业化的试剂盒(例如ExoQuick、Exoeasy)从生物样品(例如全血，血清和血浆)中分离获得外泌体。

在某些实施方案中，所述神经退行性疾病选自阿尔茨海默病(AD)或轻度认知功能障碍(MCI)。

在某些实施方案中，在步骤(3)中，通过将所述生物标志物的水平与参考值进行比较，从而预测受试者发生神经退行性疾病的风险。