[发明专利]一种非洲猪瘟假病毒及其制备方法和预防或治疗非洲猪瘟病毒感染的药物

说明书

本发明提供了一种非洲猪瘟假病毒及其制备方法和预防或治疗非洲猪瘟病毒感染的药物。本发明第一方面提供了一种非洲猪瘟假病毒的制备方法，包括将非洲猪瘟病毒基因组中p30蛋白以及p248R蛋白的全基因序列分别导入pcDNA3.1载体中，构建得到重组质粒，随后用重组质粒转染293T细胞，并使用VSV‑ΔG假病毒感染293T细胞，得到非洲猪瘟假病毒。本发明提供了一种非洲猪瘟病毒假病毒的制备方法，通过该方法制备得到的非洲猪瘟假病毒无复制活性，生物安全性高，能够为非洲猪瘟病毒的研究、抗病毒制剂和疫苗评价提供强有力的筛选工具，具备广泛的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种非洲猪瘟假病毒及其制备方法和预防或治疗非洲猪瘟病毒感染的药物，涉及基因工程和分子生物学技术领域。

背景技术

非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus）是一类基因组为双链大DNA病毒，属于非洲猪瘟病毒科，ASFV形态为正二十面体，直径约200纳米，由多层物质构成：中央为内含拟核的蛋白质核壳，由内向外分别还有一层脂质包膜和蛋白质衣壳。

非洲猪瘟病毒主要通过虫媒进行传播，具有极高的传染性和致病性，急性病例病程短、死亡率高。虽然猪瘟病毒的3D精细结构已经被破译，但直今仍未有特效疫苗或抗病毒药物。非洲猪瘟病毒的活病毒研究需要在P3实验室开展，而国内外P3实验室的数量有限，进一步限制了对该病毒的研究，因此，如何提供一种无复制活性、生物安全性高的非洲猪瘟假病毒，受到了越来越多的关注。

发明内容

本发明提供了一种非洲猪瘟假病毒及其制备方法，该假病毒无复制活性，安全性较高，有利于对非洲猪瘟病毒进行研究。

本发明还提供了一种预防和治疗非洲猪瘟病毒感染的药物，通过上述假病毒筛选得到。

本发明第一方面提供了一种非洲猪瘟假病毒的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、将非洲猪瘟病毒基因组中p30蛋白以及p248R蛋白的全基因序列分别导入pcDNA3.1载体中，构建得到pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒和pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒；

步骤2、使用所述pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒和pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒转染293T细胞，随后用VSV-ΔG假病毒感染所述293T细胞中，感染两小时后去除所述VSV-ΔG假病毒，进行细胞培养；

步骤3、培养结束后，收集细胞上清液，得到所述非洲猪瘟假病毒。

进一步地，步骤2之前，还包括将294T细胞贴壁培养8-12h。

进一步地，使用所述pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒和pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒转染293T细胞具体包括如下步骤：

将培养好的293T细胞放置于含10%FBS和1%青霉素或链霉素的DMEM培养基中，加入所述pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒、pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒以及Vigofect高效真核转染试剂，在37℃、5% CO₂下培养。

进一步地，使用0.9%的NaCl溶液稀释25μg的pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒、25μg的pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒和7.5μL的Vigofect高效真核转染试剂至500μL，混合均匀后加入到细胞培养液中。

进一步地，用VSV-ΔG假病毒加入到所述293T细胞具体包括如下步骤：

使用无血清DMEM培养基稀释所述VSV-ΔG假病毒，使所述VSV-ΔG假病毒的RLU为300000-500000，随后感染所述293T细胞，继续在37℃、5% CO₂下培养。