[发明专利]一种非洲猪瘟假病毒及其制备方法和预防或治疗非洲猪瘟病毒感染的药物

权利要求书

1.一种非洲猪瘟假病毒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、将非洲猪瘟病毒基因组中p30蛋白以及p248R蛋白的全基因序列分别导入pcDNA3.1载体中，构建得到pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒和pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒；

所述p30蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，所述p248R蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示；

步骤2、使用所述pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒和pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒转染293T细胞，随后用VSV-ΔG假病毒感染所述293T细胞，感染两小时后去除所述VSV-ΔG假病毒，进行细胞培养；

步骤3、培养结束后，收集细胞上清液，得到所述非洲猪瘟假病毒。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2之前，还包括将293T细胞贴壁培养8-12h。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，使用所述pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒和pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒转染293T细胞具体包括如下步骤：

将培养好的293T细胞放置于含10%FBS和1%青霉素或链霉素的DMEM培养基中，加入所述pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒、pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒以及Vigofect高效真核转染试剂，在37℃、5% CO₂下培养。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，使用0.9%的NaCl溶液稀释25μg的pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒、25μg的pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒和7.5μL的Vigofect高效真核转染试剂至500μL，混合均匀后加入到细胞培养液中。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，用VSV-ΔG假病毒感染所述293T细胞具体包括如下步骤：

使用无血清DMEM培养基稀释所述VSV-ΔG假病毒，使所述VSV-ΔG假病毒的RLU为330000-500000，随后感染所述293T细胞，继续在37℃、5% CO₂下培养。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，加入所述pcDNA3.1-ASF-p30重组质粒、pcDNA3.1-ASF-p248R重组质粒以及Vigofect高效真核转染试剂后的培养时间为6h，加入VSV-ΔG假病毒稀释液后的培养时间为2h。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤3包括：

使用PBS溶液清洗所述293T细胞，随后在含10% FBS的DMEM培养基中在37℃、5% CO₂条件下继续培养48h，培养结束后收取上清液，经离心、过滤后得到所述非洲猪瘟假病毒。

8.一种非洲猪瘟假病毒，其特征在于，所述非洲猪瘟假病毒经权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到。

9. Erythromycin Estolate在制备预防或治疗非洲猪瘟病毒感染的药物中的应用。

10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述Erythromycin Estolate的浓度不低于80μM。