[发明专利]一种树突状细胞疫苗、制备方法及应用

说明书

本发明属于分子生物医药技术领域，公开了一种树突状细胞疫苗、制备方法及应用，所述树突状细胞疫苗由树突状细胞和黑色素瘤细胞抗原的双基因共表达重组真核载体、β‑葡聚糖、皂苷QuilA、胆固醇和卵磷脂组成；所述双基因共表达重组真核载体为pT‑Easy载体；所述β‑葡聚糖的浓度为80～120μg/mL；所述树突状细胞疫苗由树突状细胞和黑色素瘤细胞抗原的双基因共表达重组真核载体、β‑葡聚糖、皂苷QuilA、胆固醇和卵磷脂的质量比为(3～5)：(15～20)：(8～10)：1：1。本发明提供的树突状细胞疫苗，能够激活T细胞，启动适应性免疫应答，从而杀伤黑色素瘤细胞等肿瘤细胞、抑制黑色素瘤等肿瘤细胞生长。

技术领域

本发明属于分子生物医药技术领域，尤其涉及一种树突状细胞疫苗、制备方法及应用。

背景技术

目前，癌干细胞(cancerstemcells,CSCs)是肿瘤组织中存在极少量且具有自我更新能力(self-renewal)和分化潜能(differentiationpotency)的细胞，癌干细胞并具备放射线抗性(radioresistance)和化学抗性(chemoresistance)，为肿瘤在接受放射线治疗或化学治疗后，呈现阻抗性的临床现象，是造成癌症病患对于治疗产生抗性、肿瘤容易复发，以及转移的重要关键。

多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme,GBM)是神经胶质瘤(glioma)中的恶性星状细胞瘤，为恶性脑肿瘤中最严重的一种。传统治疗多形性胶质母细胞瘤的方法为手术、放射疗法和化疗，但因多形性胶质母细胞瘤的浸润性非常高，所谓“浸润性”是因大脑中的胶质细胞为神经系统中的组成单位之一，提供支持、供给营养、维持环境恒定及提供绝缘等功能，故神经胶质细胞会紧紧包覆住神经轴突，由于轴突很长，如果神经胶质细胞发生癌变，癌细胞会顺着轴突蔓延至远方。因手术无法切除癌细胞遥远浸润部分，所以术后容易造成残瘤，术后需再辅以化学及放射治疗，但又因存在具放射线抗性和化学抗性的癌干细胞，治疗后复发率相当高。

常规的肿瘤治疗方法包括手术治疗、放射线治疗及化疗等。肿瘤疫苗为上述治疗方法以外的另一种治疗肿瘤的方法，是透过激活患者自身免疫系统，利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应，增强机体的抗癌能力，阻止肿瘤的生长、扩散和复发，以达到清除或控制肿瘤的目的。

树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是由骨髓祖细胞分化成的重要的免疫细胞，与先天性和适应性免疫反应密切相关。树突状细胞是公认最能表达抗原的细胞，会将抗原分解后呈现给可以发挥免疫效应和杀伤功能的T细胞，令免疫系统产生反应。树突状细胞肿瘤疫苗是携带肿瘤抗原信息的功能性树突状细胞，能激活专一性T细胞产生免疫反应，发挥抗肿瘤效应和免疫记忆功能。

现有技术中的树突状细胞肿瘤疫苗，都是以肿瘤细胞为标靶，即透过裂解肿瘤细胞所得到的抗原，并将该抗原负载到患者的树突状细胞上，但如此得到的树突状细胞肿瘤疫苗用于治疗癌症，往往不能解决肿瘤复发的问题，主要原因是未将肿瘤中的癌干细胞全部杀死，而造成癌组织死灰复燃的生长，甚至经由极少数的癌干细胞驱动肿瘤的形成。

环状RNA AEBP2(circRNA AEBP2)是一种新型的非编码RNA，作为重要的基因调节因子，在细胞发育、增殖和疾病发生等多种生理病理过程中发挥着重要作用。circRNAAEBP2在成熟的树突状细胞中高表达，circRNA AEBP2参与了DCs的发育，影响DCs的成熟。因此，亟需一种新的树突状细胞疫苗及其制备方法。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

(1)传统治疗多形性胶质母细胞瘤的方法为手术、放射疗法和化疗，但因多形性胶质母细胞瘤的浸润性非常高，故神经胶质细胞会紧紧包覆住神经轴突，由于轴突很长，如果神经胶质细胞发生癌变，癌细胞会顺着轴突蔓延至远方。

(2)因手术无法切除癌细胞遥远浸润部分，所以术后容易造成残瘤，术后需再辅以化学及放射治疗，但又因存在具放射线抗性和化学抗性的癌干细胞，治疗后复发率相当高。