[发明专利]具有强转运能力和胁迫耐受性的简单节杆菌工程菌株

权利要求书

1.一株具有强转运能力的简单节杆菌基因工程菌，其特征在于：基因工程菌以简单节杆菌(Arthrobacter simplex) CPCC 140451 为宿主细胞，过表达转运蛋白 ABC基因序列，转运蛋白 ABC基因序列如SEQ ID No.1 所示；所述基因工程菌以 pART2 质粒为表达载体；

工程菌构建方法步骤具体如下：

⑴以简单节杆菌 CPCC 140451 基因组为模板，通过 PCR 扩增得到该菌株中的转运蛋白ABC编码基因，转运蛋白 ABC编码基因序列为SEQ ID No.1 所示；

⑵利用基因工程手段将上述转运蛋白ABC编码基因分别连接到大肠杆菌-节杆菌穿梭质粒 pART2 的启动子后，转化到大肠杆菌 DH5α中进行复制；

⑶提取重组质粒分别电转化到简单节杆菌 CPCC 140451 中进行过表达。

2.一种催化醋酸可的松发生 C1,2 位脱氢反应的方法，其特征在于：使用如权利要求1 所述的具有强转运能力的简单节杆菌基因工程菌，转化体系中底物醋酸可的松的浓度为10-30 g/L，转化体系中的乙醇浓度 6-10%。

3.一株具有强转运能力和胁迫耐受性的简单节杆菌基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌以简单节杆菌(Arthrobacter simplex) CPCC 140451 为宿主细胞，以 pART2 质粒为表达载体，共表达序列表 SEQ ID No.1 所示的转运蛋白 ABC编码基因和SEQ ID No.8所示的热激蛋白编码基因所得。

4.一种权利要求 3 所述的具有强转运能力和胁迫耐受性的简单节杆菌基因工程菌构建方法，其特征在于：步骤具体如下：

⑴以简单节杆菌 CPCC 140451 基因组为模板，通过 PCR 扩增得到该菌株中的转运蛋白ABC编码基因和热激蛋白编码基因，转运蛋白ABC编码基因为 SEQ ID No.1所示的基因，热激蛋白编码基因为 SEQ ID No.8 所示的基因；

⑵利用基因工程手段将上述转运蛋白和热激蛋白的编码基因串联后连接到大肠杆菌-节杆菌穿梭质粒 pART2 的启动子后，化转到大肠杆菌 DH5α中进行复制；

⑶提取重组质粒分别电转化到简单节杆菌 CPCC 140451 中进行过表达。

5.一种催化醋酸可的松发生 C1,2 位脱氢反应的方法，其特征在于：使用如权利要求3 所述的具有强转运能力和胁迫耐受性的简单节杆菌基因工程菌进行醋酸可的松底物转化。