[发明专利]一种抗非那西丁单克隆抗体杂交瘤细胞株AD及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种抗非那西丁单克隆抗体杂交瘤细胞株AD及其制备方法与应用，涉及食品安全免疫检测技术领域，该单克隆抗体杂交瘤细胞株的保藏名为单克隆细胞株AD，保藏编号为CGMCC19681。以非那西丁代谢物对乙酰氨基酚与4‑溴丁酸乙酯的反应产物经水解后得到的Phe‑BA为半抗原，将半抗原与载体蛋白偶联制备免疫原Phe‑BA‑BSA。对小鼠进行免疫原Phe‑BA‑BSA注射免疫后，再通过PEG方法与骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争酶联免疫法的筛选和五次亚克隆，得到杂交瘤细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体可制成非那西丁检测盒，对非那西丁具有较好亲和力和检测灵敏度，可用于食品中非那西丁残留量的免疫检测。

技术领域

本发明属于食品安全免疫检测技术领域，具体涉及一种抗非那西丁单克隆抗体杂交瘤细胞株AD及其制备方法与应用。

背景技术

非那西丁(phenacetin，Phe)属于非淄体抗炎药((NonsteroidalAntiinflammatory Drugs，NSAIDs)，具有抗炎、止痛、退热等作用，在临床上广泛用于多种发热和各种疼痛症状的缓解。目前NSAIDs是全球使用最多的药物种类之一。全世界大约每天有3000万人在使用。随着NSAIDs使用的增多，这类药物的安全使用问题也越来越受到关注，美国食品药品监督管理局(FDA)认为NSAIDs存在潜在的心血管和消化道出血风险，这使NSAIDs的安全用药成为目前全球医药界的热点问题。尽管广泛的流行病学证据表明滥用非那西汀是肾盂癌的危险因素，但由此引起的肿瘤的基因改变在很大程度上仍不清楚。近年来，因为它有危险的副作用在一些国家已经退出了市场。目前，仍然存在非那西丁用于小动物的解热镇痛。因此，建立快速有效的检测非那西丁含量的方法具有重要意义及市场价值。

针对非那西丁的高效灵敏的检测方法是亟待解决的问题。目前的检测方法包括仪器分析法和免疫分析法。仪器分析法如高效液相色谱法、高效液相色谱串联质谱法等，由于对样品前处理繁琐，干扰物较多及仪器工作条件的限制，同时对操作人员的技术要求较高，因此仪器方法并不适用于现场检测。免疫分析方法相对于仪器检测方法，具有低成本、高通量、高灵敏、对技术人员要求低等特点，因此适用于大量样品的快速筛查。因此免疫检方法对非那西丁的检测具有重要意义。

酶联免疫法(ELISA)是一种低成本、快速且便携的免疫学检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测出结果。建立高效的免疫学检测方法，筛选高特异性的单克隆抗体是其重要前提。

对乙酰氨基酚(Paracetamol)，别称泰诺林(Tylenol)、必理通(Panadol)、百服宁(Bufferin)、扑热息痛，是非那西丁的体内代谢产物，通过抑制下丘脑体温调节中枢前列腺素合成酶，减少前列腺素PGE1、缓激肽和组胺等的合成和释放。但是至今尚未有利用酶联免疫法用于非那西丁检测的相关报道。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种非那西丁单克隆抗体杂交瘤细胞株及其制备方法与应用，由该细胞株分泌的抗体针对非那西丁具有较高的检测灵敏度，可以用来建立针对非那西丁的免疫学检测方法。

技术方案：为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明的一个目的是，提供一株非那西丁单克隆抗体杂交瘤细胞株AD，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名为单克隆细胞株AD，保藏编号为CGMCC No.19681，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期2020年04月23日。

本发明的另一个目的是，提供一种非那西丁单克隆抗体杂交瘤细胞株AD的制备方法，非那西丁完全抗原免疫小鼠通过细胞融合、HAT选择性培养基培养后，建立得到所述非那西丁单克隆抗体杂交瘤细胞株AD；所述非那西丁完全抗原免疫小鼠是由小鼠经 Phe-BA-BSA免疫原免疫所得。