[发明专利]一种基于荧光RMA法检测高危型人乳头瘤病毒的引物探针组、试剂盒及其检测方法

说明书

本申请属于生物技术检测领域，具体为一种基于荧光RMA法检测高危型人乳头瘤病毒的引物探针组、试剂盒及其检测方法，所述引物探针组包括检测HPV16亚型的引物对及对应的探针、检测HPV18亚型的引物对及对应的探针；所述HPV16亚型的检测探针上标记的荧光报告基团是FAM，荧光淬灭基团是BHQ1；所述HPV18亚型的检测探针上标记的荧光报告基团是CY5，荧光淬灭基团是BHQ2。

技术领域

本申请属于生物技术检测领域，具体为一种基于荧光RMA法检测高危型人乳头瘤病毒的引物探针组、试剂盒及其检测方法。

背景技术

人乳头瘤病毒(HPV)是一种小的球形环状双链DNA病毒，属于乳头瘤病毒科乳头瘤病毒属。它能特异性地引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，可导致多种良、恶性病变。根据生物学特征和致癌潜能，把HPV分为低危型和高危型。低危型HPV包括HPV6、11、42、43、44等，常引起外生殖器湿疣等良性病变；高危型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等，与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的发生相关，尤其是HPV16和18型是公认的致癌能力最强的亚型。因此，有针对地进行HPV16和18型的检测对宫颈癌的早期诊断具有重要意义。

目前HPV的检测主要为电镜检查法、原位杂交法、实时荧光定量PCR等。其中，电镜检查法虽然准确率很高，但费时，需特殊仪器设备，且检出阳性率很低；原位杂交法能够提供有关HPV定位和物理状态的有价值的信息，但是不能做到同一样品中多重HPV型的型特异性检测；荧光定量PCR方法对人员素质及设备要求都很高，难于在基层诊断实验室普及应用。而重组酶介导扩增(Recombinase MediatedAmplification,RMA)技术，是近年来发展出的一种敏感、特异、简便、快捷的等温核酸扩增技术，被认为是可替代PCR的核酸检测技术，主要依赖重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶三种酶。RMA反应可以在37～42℃进行，整个过程在30min内即可达到检测水平，可实现HPV的快速检测和分型。

本发明在荧光RMA法的基础上开发了同时检测HPV16、HPV18亚型的试剂盒。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本申请提供了一种基于荧光RMA法检测高危型人乳头瘤病毒的引物探针组、试剂盒及其检测方法，本申请是通过下述方案实现的：

一种基于荧光RMA法检测高危型人乳头瘤病毒的引物探针组，包括检测HPV16亚型的引物对及对应的探针、检测HPV18亚型的引物对及对应的探针，其中：

(1)HPV16亚型引物和探针序列为：

HPV16-F：

5’-GTAGGTGTTGAGGTAGGTCGTGGTCAGCCATTA-3’；

HPV16-R：

5’-TACTGCAACATTGGTACATGGGGATCCTTTGCC-3’；

HPV16-P：

5’-AATTGGATGACACAGAAAATGCTAGTGC(FAM-dT)(THF)A(BHQ1-dT)GCAGCAAATGCAGGT(C3-spacer)-3’。

(2)HPV18亚型引物和探针序列为：

HPV18-F：

5’-AGCCTTTAGGTGTTGGCCTTAGTGGGCATCCAT-3’；

HPV18R：

5’-CAATAGCAGGGGCACAGCCCAAAATACATAACT-3’；

HPV18-P：