[发明专利]RNA病毒核酸检测参照标准品及其用途

权利要求书

1.重组慢病毒载体，其特征在于在慢病毒载体中包含RNA病毒核酸检测靶向的RNA序列片段和用于示踪的荧光蛋白，

所述RNA病毒为SARS-CoV-2病毒，

所述重组慢病毒载体至少包含以下元件：

(1)检测靶向序列1，所述检测靶向序列1源自冠状病毒SARS-CoV-2的ORF1ab的编码基因片段，

(2)检测靶向序列2，所述检测靶向序列2源自冠状病毒SARS-CoV-2的S蛋白的编码基因片段，所述检测靶向序列2的序列为SEQ ID NO:2所示的S基因检测序列；

(3)检测靶向序列3，所述检测靶向序列3源自冠状病毒SARS-CoV-2的E蛋白的编码基因片段，

(4)检测靶向序列4，所述检测靶向序列4源自冠状病毒SARS-CoV-2的N蛋白片段的编码基因片段，

其中所述检测靶向序列1的序列由SEQ ID NO:1序列组成，检测靶向序列3的序列由SEQID NO:3序列组成，检测靶向序列4的序列由SEQ ID NO:4序列组成，

其中所述重组慢病毒载体不包含完整的冠状病毒SARS-CoV-2的完整基因组序列。

2.权利要求1所述的重组慢病毒载体，在检测靶向序列1、检测靶向序列4之间各自通过接头连接。

3.权利要求2所述的重组慢病毒载体，所述接头长度为6-200bp。

4.权利要求1所述的重组慢病毒载体，其特征在于，所述重组慢病毒载体还包含示踪蛋白的编码基因。

5.权利要求1-4任一项所述的重组慢病毒载体，其特征在于，所述检测靶向序列1-4的长度为80bp-1.5kb，并且所述检测靶向序列1-4及检测靶向序列1-4之间的接头序列的总长度不超过7kb。

6.权利要求1-4任一项所述的重组慢病毒载体，其特征在于，所述慢病毒载体为lentivirus病毒载体或FIV病毒载体。

7.权利要求6所述的重组慢病毒载体，其中lentivirus病毒载体为pEZ-Lv201。

8.权利要求1-3任一项所述的重组慢病毒载体，其特征在于，所述重组慢病毒载体包括但不限于二代、三代慢病毒载体。

9.权利要求1所述的重组慢病毒载体，其中所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白GFP或红色荧光蛋白RFP。

10.利用权利要求1-9任何一项所述的重组慢病毒载体制备的重组慢病毒颗粒。

11.权利要求10所述的重组慢病毒颗粒，其是通过将所述重组慢病毒载体转染到人293T细胞株中来制备。

12.权利要求1-9任一项所述的重组慢病毒载体或权利要求10或11所述的重组慢病毒颗粒在以下用途中的应用：

1)制备作为检测SARS-CoV-2携带者或样品中SARS-CoV-2的参照标准品的试剂中的应用；

2)制备检测SARS-CoV-2的试剂或试剂盒中的应用；

3)制备用于定量样品中SARS-CoV-2的试剂中的应用；或

4)制备作为COVID-19患者治疗效果评估和恢复出院的SARS-CoV-2定量的可掺入待检样本的参照标准品的试剂中的应用。

13.权利要求12所述的应用，其中所述作为检测SARS-CoV-2携带者或样品中SARS-CoV-2的参照标准品用于阳性和阴性的判断，或者用于样本采集、样品保存和样品RNA提取过程中的质量分析和质量控制。

14.参照标准品RNA，其是通过提取权利要求10所述重组慢病毒颗粒制备的RNA。