[发明专利]一步法新型冠状病毒中和抗体磁性微球检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种一步法新型冠状病毒中和抗体磁性微球检测试剂盒，由设在盒体内的偶联有重组人ACE2受体蛋白(ACE2‑hFc)的磁微球、作为阳性对照的RBD中和抗体标准品溶液、阴性对照、样品稀释液、RBD蛋白(HRP‑RBD)酶结合物、20×浓缩洗涤液、发光液构成。本发明还公开了所述试剂盒在检测含新型冠状病毒中和抗体生物样品中的应用。实验证实本发明的试剂盒稳定性高、选择性强，检测速度快、费用低廉、易于操作，克服了现有技术中检测中和抗体时，实验室环境要求高、操作时长等缺点，将操作时间由120分钟缩短至20分钟。具有极大的临床应用前景。

技术领域

本发明涉及一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中和抗体的检测，尤其涉及一种一步法新 型冠状病毒中和抗体磁性微球检测试剂盒及其应用，属于临床检验技术领域。

背景技术

由新冠病毒(SARS-CoV-2)引起的新冠肺炎(COVID-19)大流行是一个世纪以 来人类面临的最严峻挑战。新型冠状病毒即“SARS-CoV-2”感染后常见体征有呼吸道 症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急 性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。

研究表明，冠状病毒S蛋白是病毒毒力的关键因子，是决定病毒毒力、组织嗜性和宿主 范围的关键部分，也是中和抗体和疫苗设计的主要靶标。而评价疫苗接种后的效果，最直接 的检测方法为新冠中和抗体的检测。因为，能识别新冠病毒的S(刺突)蛋白上的RBD区(受 体结合域)的中和抗体，就可以阻断新冠病毒和人细胞上的ACE2受体结合，使得新冠病毒 无法感染人细胞。此外，中和抗体可以与其他免疫成分——例如补体、吞噬细胞和自然杀伤 细胞等——相互作用。这些效应反应都可以帮助清除病毒和被感染的细胞。中和抗体浓度越 高，一般保护作用越好。因此，早期预测疫苗好坏的指标之一，就是看它能诱发人体内产生 多少中和抗体。

传统的检测中和抗体的方法为活病毒或假病毒中和试验。试验方法需要专业细胞培养过 程，对实验等级要求高，周期长、操作复杂，不适合普通接种疫苗人群高通量筛查。

中和抗体滴度可以反映出血液样品中抗体水平的指标，即接种疫苗后人体内免疫应答的 好坏或强弱。随着新型冠状病毒疫苗的上市，对接种新冠疫苗人群和新冠感染后康复人群的 中和抗体评价需要快速、可靠的、稳定、安全的评价方法。目前已有关于新型冠状病毒中和 抗体酶联免疫的竞争抑制检测方法(CN202010919164.X、CN202010952237.5)，但上述专 利中公布的实验检测方法均属酶联免疫法，在实验操作中存在操作时间长(2-3小时)，手 工操作等缺点。因新冠病毒传染力很强，增加人工操作和反应时间，也相应增加了操作人员 被感染的可能性。此外，因竞争抑制法中，因加样时间和加样间隔的影响，易对最终检测结 果造成假阳结果，会影响最终对中和抗体含量的判断。

磁微粒化学发光技术是将磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术三者结合起来的 一种新兴分析方法。该技术充分利用了磁性分离技术的快速易自动化性，化学发光技术的高 灵敏度性，以及免疫分析的特异性，是目前最受欢迎的标记免疫分析技术。

现有技术中，经检索以辣根过氧化物酶标记RBD蛋白(HRP-RBD)和重组人ACE2受体蛋 白(ACE2-hFc)之间的相互作用可以被SARS-CoV-2RBD中和抗体阻断为原理，制备有关基于磁微粒化学发光法的一步法新型冠状病毒中和抗体磁性微球检测试剂盒及其应用还未 见报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种一步法新型冠状病毒中和抗体磁 性微球检测试剂盒及其应用。

本发明所述的一步法新型冠状病毒中和抗体磁性微球检测试剂盒，由设在盒体内的偶联 有重组人ACE2受体蛋白(ACE2-hFc)的磁微球、作为阳性对照的RBD中和抗体标准品溶 液、阴性对照、样品稀释液、RBD蛋白(HRP-RBD)酶结合物、20×浓缩洗涤液、发光液构成；

其特征在于：