[发明专利]一种氨氧化细菌的接合转移方法在审
| 申请号： | 202110199333.1 | 申请日： | 2021-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN112961877A | 公开（公告）日： | 2021-06-15 |
| 发明（设计）人： | 赵辰;李辰宇;王景峰;谌志强;邱志刚;王尚;薛斌;张曦;杨晓波 | 申请（专利权）人： | 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N1/21;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 300041*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 氧化 细菌 接合 转移 方法 | ||
1.一种氨氧化细菌的接合转移方法，其特征在于，步骤包括：
(1)供体菌富集培养
将目的质粒导入供体菌中，得目的供体菌，而后将供体菌富集培养，得活化目的供体菌；
(2)氨氧化细菌富集培养
将氨氧化细菌富集培养，得活化氨氧化细菌；
(3)氨氧化细菌接合转移
将活化目的供体菌和活化氨氧化细菌混合并加入缓冲液，调至活化目的供体细菌终浓度为2×108cfu/ml，活化氨氧化细菌终浓度为108cfu/ml；培养4h以上，得接合转移菌液。
2.如权利要求1所述的一种氨氧化细菌的接合转移方法，其特征在于，步骤(1)中，活化目的供体菌的浓度为109cfu/mL。
3.如权利要求1所述的一种氨氧化细菌的接合转移方法，其特征在于，步骤(2)中，活化氨氧化细菌的浓度为109cfu/mL。
4.如权利要求1所述的一种氨氧化细菌的接合转移方法，其特征在于，步骤(3)中，所述缓冲液成分包括：0.5g/L硫酸铵、2.0g/L磷酸氢二钾、1.5g/L七水硫酸镁、20g/L胰化蛋白胨、10g/L酵母提取物，1.0g/L七水合硫酸亚铁和10.0g/L氯化钠，溶液为水。
5.如权利要求1所述的一种氨氧化细菌的接合转移方法，其特征在于，步骤(3)中，培养温度为26℃。
6.如权利要求1所述的一种氨氧化细菌的接合转移方法，其特征在于，步骤(3)中，转速为100rpm。
7.如权利要求1所述的一种氨氧化细菌的接合转移方法，其特征在于，还包括：(4)氨氧化细菌接合转移的鉴定，具体步骤为：将权利要求1步骤(3)的接合转移菌液置于选择培养基中筛选，长出的红色菌落，即为成功转入目的质粒的氨氧化细菌。
8.如权利要求7所述的一种氨氧化细菌的接合转移方法，其特征在于，选择培养基包括：2.0g/L硫酸铵、0.75g/L磷酸氢二钾、0.25g/L磷酸二氢钠、0.01g/L七水硫酸镁、0.03g/L硫酸锰、0.1g/L碳酸钠和15g/L琼脂粉、80mg/L氨苄青霉素、60mg/L卡那霉素和40mg/L盐酸四环素，溶液为水。
9.如权利要求7所述的一种氨氧化细菌的接合转移方法，其特征在于，培养温度为26℃，培养时间为5-7天。
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