[发明专利]构建瘦肉率高、生长快且抗蓝耳病和系列腹泻病的优质猪核移植供体细胞的方法及其应用有效
| 申请号： | 202110197015.1 | 申请日： | 2021-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN112779292B | 公开（公告）日： | 2023-03-10 |
| 发明（设计）人： | 牛冬;汪滔;马翔;曾为俊;刘璐;王磊;程锐;赵泽英;段星;陶裴裴;黄彩云 | 申请（专利权）人： | 南京启真基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;徐冬涛 |
| 地址： | 211306 江苏省南京市高淳区经*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 构建 瘦肉 生长 抗蓝耳病 系列 腹泻 优质 移植 供体 细胞 方法 及其 应用 | ||
1.一种用于猪MSTN、SST、CD163及pAPN四基因编辑的CRISPR/Cas9系统，其特征在于，包含Cas9表达载体、针对猪MSTN基因的gRNA表达载体、针对猪SST基因的gRNA表达载体、针对猪CD163基因的gRNA表达载体以及针对猪pAPN基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体质粒全序列如SEQ ID NO.2所示；所述的针对猪MSTN基因的gRNA表达载体表达 SEQ IDNO.18 所示的 gRNA，其靶点如 SEQ ID NO. 15 所示，该表达载体由SEQ ID NO.16和SEQID NO.17所示的单链DNA退火而成的双链插入载体骨架pKG-U6gRNA所得；所述的针对猪SST基因的gRNA表达载体表达 SEQ ID NO.24 所示的 gRNA，其靶点如 SEQ ID NO.21 所示，该表达载体由SEQ ID NO.22和SEQ ID NO.23所示的单链DNA退火而成的双链插入载体骨架pKG-U6gRNA所得；所述的针对猪CD163基因的gRNA表达载体表达 SEQ ID NO.30 所示的gRNA，其靶点如 SEQ ID NO.27所示，该表达载体由SEQ ID NO.28和SEQ ID NO.29所示的单链DNA退火而成的双链插入载体骨架pKG-U6gRNA所得；所述的针对猪pAPN基因的gRNA表达载体表达 SEQ ID NO.36 所示的 gRNA，其靶点如 SEQ ID NO.33 所示，该表达载体由SEQID NO.34和SEQ ID NO.35所示的单链DNA退火而成的双链插入载体骨架pKG-U6gRNA所得；载体骨架pKG-U6gRNA的质粒全序列如SEQ ID NO.3所示。
2.权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统在构建MSTN、SST、CD163和pAPN四基因敲除的猪重组细胞中的应用。
3.一种敲除MSTN、SST、CD163和pAPN基因的猪重组细胞，其特征在于由权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统共转染猪原代成纤维细胞经验证后所得。
4.权利要求3所述的重组细胞在构建MSTN、SST、CD163和pAPN四基因敲除的克隆猪中的应用。
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