[发明专利]一种COVID-19假病毒及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种COVID‑19假病毒及其制备方法和用途本发明，所述COVID‑19假病毒由外壳蛋白质粒与辅助质粒经病毒包装而成，所述外壳蛋白质粒包括表达SARS‑CoV‑2 S蛋白的质粒、表达SARS‑CoV‑2 M蛋白的质粒和表达SARS‑CoV‑2 E蛋白的质粒。本发明的COVID‑19假病毒采用三质粒系统包装，以S/M/E蛋白替代表达VSV‑G蛋白，比仅含有S蛋白的假病毒感染能力更强、灵敏度更高。而且，COVID‑19假病毒携带两种荧光报告基团，不同的荧光报告基团可应用于不同的场景，使得COVID‑19假病毒应用时更简便。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种COVID-19假病毒及其制备方法和用途。

背景技术

COVID-19是一种新型的冠状病毒SARS-CoV-2引起的疾病，SARS-CoV-2具有极强的传播能力。SARS-CoV-2是一种有包膜的单链RNA病毒，RNA长度达到近30kb，N蛋白（Nucleocapsid）外壳的包膜中含有S（Spike protein，刺突蛋白）、M（Membrane protein，膜蛋白）和E（Envelope protein，包膜蛋白）三种蛋白。目前发现的最主要的感染途径是病毒的S蛋白的RBD（Receptor Binding Domain，受体结合区）与细胞膜表面的ACE2蛋白结合，导致细胞膜与病毒包膜融合，最终病毒感染宿主细胞。

药物治疗和疫苗预防两种途径降低新型冠状病毒的危害。目前已经有超过5款疫苗三期临床结束，已经上市或将要上市，还有更多的疫苗处在临床阶段，中和抗体的新药研究也已经进入临床阶段。而如何评价药物和疫苗的作用，成为接下来研究的重点。

疫苗的评价除了临床实验外，如何更好的跟踪接种后中和抗体的产生，是目前亟待解决的问题。疫苗接种后的体外评价主要有三种方式，第一种是对抗真病毒的感染，第二种是拮抗ACE2与S蛋白（特别是RBD）的结合，第三种是对抗假病毒的感染。第一种方式是最接近真实的，但是对于实验环境有较高的要求，无法作为普及性检测方法；第二种只是评价了RBD与ACE2的结合抑制，对于病毒感染过程中的拮抗无法检测到；而第三种用假病毒的方式克服了前两种的弊端，因为不是真病毒，不具备感染能力，普通实验室即可操作，模拟了病毒感染宿主细胞的过程，比阻断蛋白之间的结合更真实。

目前大多数实验室做的假病毒外壳蛋白主要选择S蛋白，S蛋白和ACE2结合是感染的必要条件，但是现有技术中忽略了M蛋白和E蛋白的辅助作用。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种COVID-19假病毒及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种COVID-19假病毒，所述COVID-19假病毒由外壳蛋白质粒与辅助质粒经病毒包装而成，所述外壳蛋白质粒包括表达SARS-CoV-2 S蛋白的质粒、表达SARS-CoV-2 M蛋白的质粒和表达SARS-CoV-2 E蛋白的质粒。

本发明还提供所述的COVID-19假病毒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将外壳蛋白质粒与辅助质粒混合，转染宿主细胞，转染后收集的细胞上清中即含有假病毒，其中所述外壳蛋白质粒包括表达SARS-CoV-2 S蛋白的质粒、表达SARS-CoV-2 M蛋白的质粒和表达SARS-CoV-2 E蛋白的质粒。

本发明还提供所述COVID-19假病毒在筛选或评价COVID-19预防、治疗药物中的用途。

本发明还提供用于筛选或评价COVID-19预防、治疗药物的组合物，所述组合物的有效物质包括所述的COVID-19假病毒。

本发明还提供一种用于体外检测COVID-19预防、治疗药物疗效的方法，所述方法包括以下步骤：将所述COVID-19假病毒与COVID-19的靶标样本、预防或治疗药物共同孵育，孵育结束后检测发光强度。