[发明专利]检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物、试剂盒及其应用

说明书

本申请公开了一种检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物、试剂盒及其应用。所述抗原组合物包括第一抗原，所述第一抗原的氨基酸序列包括SEQ IDNo.3所示序列。所述抗原组合物还包括第二抗原，所述第二抗原的氨基酸序列包括SEQ ID No.2所示序列。所述抗原组合物还包括第三抗原，所述第三抗原的氨基酸序列包括SEQ ID No.1所示序列。以本发明的抗原组合物做为ELISA法的包被抗原，对临床样本血清型的检出率明显高于现有的进口试剂盒。

技术领域

本发明属于动物传染病防治技术领域，检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物、试剂盒及其应用。

背景技术

滑液囊支原体(别名：滑液支原体)感染最早报道于1954年，发病鸡群主要表现滑膜炎；滑液囊支原体的发病日龄一般在30日龄左右，病鸡出现羽毛蓬乱，精神沉郁，采食量下降，无法站立。有的鸡群在15日龄～20日龄也会发病，应该与母源抗体和垂直传播有关。滑液囊支原体的膜蛋白包含可变表面脂蛋白和血凝素蛋白，具有逃避宿主免疫应答的特性。血凝素蛋白是机体针对滑液囊支原体的主要免疫应答目标，但是滑液囊支原体每次感染过程中会在转录水平上对血凝素蛋白的表达进行调控，严重干扰了机体正常免疫应答效应的发挥，从而实现了免疫逃避。自2010年，南方的三黄鸡出现严重的滑液囊支原体感染后，北方的蛋鸡自2013年以来，也开始大规模出现滑液囊支原体的感染，成为困扰蛋鸡和种鸡的一个重要疾病。为了该病的防控，采取了较多的措施，包括鸡舍条件的改善、抗生素的使用及弱毒活疫苗的免疫等，但是都没有取得理想的效果。

滑液囊支原体抗体的检测方法主要有玻片凝集法和ELISA法等，玻片凝集法相对简单，一般实验室都可以开展这项工作。但是，鸡毒支原体和滑液囊支原体存在一部分共同抗原，使用玻片凝集法时容易出现一定程度的干扰。ELISA检测方法目前有美国爱德士公司和以色列Biogal公司的产品。在实验室应用过程中，国内流行的菌株免疫的SPF鸡，以及国内发病鸡群的血清学调查过程中，使用进口的检测方法抗体阳性率低，不能有效开展疫苗的抗体评价。出现该问题的主要原因，可能是检测试剂盒的包被抗原成分单一，滑液囊支原体在感染免疫逃避过程中某些蛋白表达水平降低，造成目标蛋白的抗体弱，而导致现有商品化试剂盒在检测中出现假阴性的情况。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物、试剂盒及其应用。本发明利用反向疫苗学技术，筛选滑液囊支原体独有的蛋白，并开展了蛋白的反应原性、反应特异性、有效组合对临床样本的检测试验，形成了一种用于检测滑液囊支原体抗体的有效抗原及组合，该抗原或抗原组合可以用于ELISA等抗体检测的试剂盒中，提高滑液囊支原体的检出率。

一方面，本申请提供了一种用于特异性检测鸡滑液囊支原体抗体的抗原组合物，包括第一抗原，

所述第一抗原的氨基酸序列包括SEQ ID No.3所示序列、或与SEQ ID No.3所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上且功能与SEQ ID No.3所示序列相同或相近的序列。

在上述抗原组合物中，还包括第二抗原，所述第二抗原的氨基酸序列包括SEQ IDNo.2所示序列，或与SEQ ID No.2所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上且功能与SEQ ID No.2所示序列相同或相近的序列；优选的，所述第一抗原和所述第二抗原的质量比为1：(1-3)，更优选，1：(1.5-2.5)，更优选，1：2；

和/或，所述抗原组合物还包括第三抗原，所述第三抗原的氨基酸序列包括SEQ IDNo.1所示序列，或与SEQ ID No.1所示序列的同源性在80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％以上且功能与SEQ ID No.1所示序列相同或相近的序列，

优选的，所述抗原组合物中所述第一抗原和所述第三抗原的质量比为1：(6-16)，更优选，1：(9-13)，更优选，1：11。