[发明专利]一种GPC-3化学发光试剂盒

说明书

本发明公开一种GPC‑3化学发光试剂盒，属于生物检测技术领域，该GPC‑3化学发光试剂盒所述试剂盒包括：磁珠稀释液试剂，所述磁珠稀释液试剂的组分包括：包被GPC‑3捕获抗体的金磁微粒和第一稀释液；所述包被GPC‑3捕获抗体的金磁微粒的固相载体为微米级金磁微粒，所述金磁微粒包含金磁微粒内核和以金属纳米粒子修饰的外壳。本发明通过采用微米级的金磁微粒作为固相载体，将巯基活化后的GPC‑3捕获抗体固定在金磁微粒表面的载体上，再加入纯化的酶标二抗，双抗体夹心法测试，通入化学发光底物AMPPD，对GPC‑3的进行定量检测；采用本发明的一种GPC‑3化学发光试剂盒进行GPC‑3的测量，可检测的GPC‑3最低浓度低，灵敏度高、线性范围更宽，样本相关性好。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，特别涉及一种GPC-3化学发光试剂盒。

背景技术

GPC-3(Glypican-3)是Glypican家族中的一员，属于膜性硫酸乙酰肝素多糖蛋白。在哺乳动物的胚胎期，GPC3通过影响多个分子信号通路而对组织器官的发育起到重要的调控作用，其功能缺失将导致过度生长和畸变综合征(SGBS)。成人GPC-3的异常表达与多种肿瘤的发生发展关系密切。GPC-3在肝细胞癌(HCC)中表达上调，与HCC的生物学特性相关，在肝癌的早期诊断、生物治疗和预后评估中具有良好的应用前景。

目前现有文献公开报道中GPC-3物质的检测方法为ELISA方法和化学发光的检测方法检测血清中GPC-3的含量。传统的化学发光检测方法中，需要对抗原或抗体进行标记，存在着以下的缺陷问题包括：一是标记步骤复杂、费力、耗时，且需要专业的或操作熟练的人员；二是标记后的抗体或抗原分子生物活性降低，限制了线性范围和灵敏度等分析性能；三是通常采用夹心免疫分析，需要引入标记二抗分子，操作过程较为复杂、耗时，且分析成本较高：四是抗体或抗原分子上能够标记的酶数量有限。综上，现有的GPC-3物质的检测方法存在步骤复杂、费力、耗时；检测线性范围受限制，能够标记的酶数量低，使检测灵敏度低等缺陷。

因此，本领域技术人员致力于开发一种GPC-3化学发光试剂盒，旨在解决现有技术中GPC-3检测过程中抗原或抗体进行标记后生物活性降低，限制了线性范围和灵敏度低的缺陷。

发明内容

鉴于上述问题，提出了本发明以便提供一种克服上述问题或者至少部分地解决上述问题的一种GPC-3化学发光试剂盒。

为实现上述目的，本发明实施例提供一种GPC-3化学发光试剂盒，所述试剂盒包括：磁珠稀释液试剂，

所述磁珠稀释液试剂的组分包括：包被GPC-3捕获抗体的金磁微粒和第一稀释液；所述包被GPC-3捕获抗体的金磁微粒中的金磁微粒的制备方法包括：

获取氯金酸水溶液；

将裸磁微球溶液进行稀释，稀释后依次滴加入所述氯金酸水溶液和还原剂，获得第一反应溶液；

在搅拌条件下，加热所述第一反应溶液至沸腾，并保持一定时间的沸腾状态，后冷却至室温，获得表面修饰胶体金层的金磁微粒。

可选的，将裸磁微球溶液进行稀释，稀释后依次滴加入所述氟金酸水溶液和还原剂，获得第一反应溶液，包括：

将裸磁微球溶液与稀释剂按体积比1∶10进行稀释，稀释后依次滴加入所述氯金酸水溶液和还原剂，获得第一反应溶液；

所述裸磁微球溶液、所述氟金酸水溶液和所述还原剂的体积比为10∶2∶1，所述第一反应溶液中的氯金酸浓度是所述氯金酸水溶液浓度的0.02倍。

可选的，所述氯金酸水溶液和所述还原剂的滴加时间总和不大于45min。

可选的，所述包被GPC-3捕获抗体的金磁微粒的制备方法包括：