[发明专利]一种GPC-3化学发光试剂盒

权利要求书

1.一种GPC-3化学发光试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：磁珠稀释液试剂，

所述磁珠稀释液试剂的组分包括：包被GPC-3捕获抗体的金磁微粒和第一稀释液；所述包被GPC-3捕获抗体的金磁微粒中的金磁微粒的制备方法包括：

获取氯金酸水溶液；

将裸磁微球溶液进行稀释，稀释后依次滴加入所述氯金酸水溶液和还原剂，获得第一反应溶液；

在搅拌条件下，加热所述第一反应溶液至沸腾，并保持一定时间的沸腾状态，后冷却至室温，获得表面修饰胶体金层的金磁微粒。

2.根据权利要求1所述的一种GPC-3化学发光试剂盒，其特征在于，将裸磁微球溶液进行稀释，稀释后依次滴加入所述氯金酸水溶液和还原剂，获得第一反应溶液，包括：

将裸磁微球溶液与稀释剂按体积比1∶10进行稀释，稀释后依次滴加入所述氯金酸水溶液和还原剂，获得第一反应溶液；

所述裸磁微球溶液、所述氯金酸水溶液和所述还原剂的体积比为10∶2∶1，所述第一反应溶液中的氯金酸浓度是所述氯金酸水溶液浓度的0.02倍。

3.根据权利要求2所述的一种GPC-3化学发光试剂盒，其特征在于，所述氯金酸水溶液和所述还原剂的滴加时间总和不大于45min。

4.根据权利要求1所述的一种GPC-3化学发光试剂盒，其特征在于，所述包被GPC-3捕获抗体的金磁微粒的制备方法包括：

将第一GPC-3抗体溶液和硫醇类还原剂混合，并在室温下反应25-35min，以打开所述GPC-3抗体重链之间的二硫键，除杂后加入偶联缓冲液，获得第一活化GPC-3抗体溶液；

将所述第一活化GPC-3抗体溶液与所述金磁微粒混合，后置于温度为35℃～39℃且恒温条件下进行反应，反应结束后洗除与金磁微粒非牢固结合的抗体，获得包被GPC-3捕获抗体的金磁微粒。

5.根据权利要求1所述的一种GPC-3化学发光试剂盒，其特征在于，所述包被GPC-3捕获抗体的金磁微粒和所述第一稀释液的体积比为1∶18～22。

6.根据权利要求1或5所述的一种GPC-3化学发光试剂盒，其特征在于，所述第一稀释液组分包括：100mM PB，0.1％(重量)Tween20，0.5％(重量)BSA，0.1％(重量)PC-300，所述第一稀释液的pH值为7.2-7.8。

7.根据权利要求1所述的一种GPC-3化学发光试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：酶标二抗稀释液试剂，

所述酶标二抗稀释液试剂的组分包括：酶标二抗和第二稀释剂；所述酶标抗体复合物的制备方法包括：

将第二GPC-3抗体和抗体活化剂混合并进行活化反应，室温条件下活化至少20min，反应结束后纯化去杂，获得第二活化GPC-3抗体；

将免疫酶和酶活化剂混合并进行活化反应，室温条件下活化至少15min，反应结束后纯化去杂，获得活化免疫酶；

将所述第二活化GPC-3抗体与所述活化免疫酶混合并加入MgCl₂溶液，在2-8℃温度下反应至少12h，反应结束后纯化去杂，获得酶标抗体复合物。

8.根据权利要求7所述的一种GPC-3化学发光试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗包含酶标抗体复合物和甘油，所述酶标二抗包含酶标抗体复合物和所述甘油的体积比为1∶0.8～1.2，所述免疫酶为碱性磷酸酶。

9.根据权利要求7所述的一种GPC-3化学发光试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗和所述第二稀释剂的体积比为1∶480～520。

10.根据权利要求7或9所述的一种GPC-3化学发光试剂盒，其特征在于，所述第二稀释剂的组分包括：100mM的Tris，0.9％(重量)NaCl，4mM MgCl2，0.4mM ZnCl2，0.1％(重量)PC-300，1％(重量)BSA，5％(重量)胎牛血清，所述第二稀释剂的PH值为6.2-6.8。