[发明专利]辣椒果实中类胡萝卜素组分的提取及含量测定方法

说明书

本发明属于色谱检测技术领域，公开了一种辣椒果实中类胡萝卜素组分的提取及含量测定方法，包括标准品的配制、样品的前处理、高效液相检测以及后续的计算分析过程，其中标准品配制过程中不同组分采用不一样的标准品配制浓度，样品前处理过程根据不同时期的辣椒果实采取不同的处理方法，能够很好的分离不同发育阶段辣椒果实中的7种类胡萝卜素组分，分离后各组分的含量均较高，为辣椒果实类胡萝卜素各组分的测定提供了较准确高效的方法。

技术领域

本发明涉及色谱检测技术领域，更具体的说是涉及一种辣椒果实中类胡萝卜素组分的提取及含量测定方法。

背景技术

辣椒亦称番椒、茄椒或海椒，原产中南美洲、墨西哥、秘鲁等地，是茄科辣椒属一年生蔬菜，其果实颜色因种类而异，大部分品种果实成熟过程中颜色从绿色、乳白色转变为棕色、黄色、橙色、红色等，果实主要以类胡萝卜素为主。类胡萝卜素具有重要的保健及经济价值：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素和β-隐黄质作为膳食可直接为人提供维生素A，番茄红素可预防心血管疾病和前列腺癌，玉米黄质和叶黄素可以降低黄斑病变风险，此外，成熟辣椒果实所含的辣椒红素和辣椒玉红素作为自然源的食品添加剂和增色剂，被广泛应用于食品和化妆品行业。

新疆凭借其独特的自然气候条件和红色产业政策的扶植，已成为全国最大的制干辣椒生产基地。色价和辣度是新疆制干辣椒最重要的商品性状，其中辣度的测定方法已十分成熟，但类胡萝卜素有700多种同分异构体，因此类胡萝卜素各组分的测定难度较大，且类胡萝卜素的组分及含量对辣椒果实颜色形成起着决定作用。

目前辣椒中已分离出50多种类胡萝卜素，已鉴别出30多种，类胡萝卜素组分的测定主要以液相色谱为主，原材料的处理和液相条件不同，分离出的组分差别较大。现有技术中类胡萝卜素的测定主要有以下几种方法：一是以二氯甲烷-乙醇(体积比为1:1)为提取溶剂，流动相A为甲醇-乙腈(V甲醇:V乙腈＝55:45)，B为100％甲基叔丁基醚，以VA:VB＝90:10匀速洗脱，此方法能较好地鉴定辣椒果实中的叶黄素、辣椒红素、β-胡萝卜素等组分，但是分离出的类胡萝卜素组分较少；二是以石油醚为提取溶剂，KOH皂化，甲醇-乙腈为流动相，该方法能分离辣椒叶片中的叶黄素、玉米黄素、β-胡萝卜素；第三种是以丙酮和乙酸乙酯为提取液，KOH皂化，流动相A为乙腈，B为水，C为甲基叔丁基醚(MTBE)和甲醇，D为乙酸乙酯，此法能够分离辣椒叶片中的新黄质、紫黄质、玉米黄素、叶黄素、番茄红素、八氢番茄红素、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素等。由上可知，辣椒叶片的类胡萝卜素组分测定较成熟，但果实中类胡萝卜素组分的分离及测定方法尚不完善，效率较低。

因此，如何提供一种辣椒果实中类胡萝卜素组分的提取及含量测定方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种辣椒果实中类胡萝卜素组分的提取及含量测定方法，本发明提供的方法能够同时提取7种类胡萝卜素，并能通过高效液相色谱法将7种组分准确定量。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

辣椒果实中类胡萝卜素组分的提取及含量测定方法，包括以下步骤：

(1)标准品的配制：β-胡萝卜素、叶黄素标准品采用甲醇和MTBE的混合溶液稀释成50、100、150、200、250ug/ml浓度梯度的混合标液，α-胡萝卜素、新黄质、紫黄质、玉米黄素、辣椒红素采用甲醇和MTBE的混合溶液稀释成0.625、1.25、2.5、5、10ug/ml浓度梯度的单标，备用；

(2)样品的前处理：将新鲜辣椒果实样品在液氮中研磨成匀浆，依次用氯仿-二氯甲烷混合提取溶剂、氯化钠溶液离心提取，收集有机相，用氮气吹干，得到辣椒果实干粉样品，备用；

(3)将步骤(1)配制的标准品溶液进行HPLC检测，得到各标准品溶液对应的高效液相色谱图，分别对各个标准品按照其浓度和峰面积，绘制标准曲线，得到各个标准品的线性回归方程；