[发明专利]一种制备高效核酸酶的方法及其应用

权利要求书

1.一种制备高效核酸酶的方法，其中，所述方法包括：

步骤(1)克隆所述高效核酸酶的基因，重组到载体，得到包含有所述高效核酸酶基因的载体，其中，所述高效核酸酶基因如SEQ ID No.1所示，或者所述高效核酸酶基因如SEQ IDNo.2所示；

步骤(2)将所述包含有高效核酸酶基因的载体转化至酵母细胞，筛选基因组中重组有所述高效核酸酶基因的酵母细胞；

步骤(3)对所述基因组中重组了所述高效核酸酶基因的酵母细胞进行诱导表达，得到分泌表达的所述高效核酸酶；以及

步骤(4)分离所述分泌表达的高效核酸酶，纯化，得到所述高效核酸酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(1)中所述载体为pPICZɑA载体，所述步骤(2)中所述酵母细胞为酵母GS115株；所述步骤(3)中所述诱导的诱导剂为甲醇。

3.一种抗原蛋白的纯化方法，其中，所述纯化方法包括：

步骤(1)将表达所述抗原蛋白的细胞破碎裂解，释放胞内表达的所述抗原蛋白；

步骤(2)在所述步骤(1)的所述裂解释放的抗原蛋白中添加所述权利要求1～2任一项所述的方法制备的高效核酸酶，酶解所述破碎细胞中的核酸；以及

步骤(3)待所述步骤(2)的所述酶解完成后，分离所述抗原蛋白。

4.根据权利要求3所述的纯化方法，其中，所述步骤(2)中所述细胞为原核细胞；优选地，所述细胞为E.coli。

5.根据权利要求3所述的纯化方法，其中，所述步骤(2)中所述酶解温度为16℃。

6.根据权利要求3所述的纯化方法，其中，所述步骤(1)中所述抗原蛋白选自非洲猪瘟病毒EP153R蛋白、E248R蛋白、A238L蛋白、CD2v蛋白、CP312R蛋白、P22蛋白、P30蛋白、P54蛋白和pK205R蛋白；鸡传染性贫血病毒VP1蛋白和VP2蛋白；禽腺病毒Penton蛋白，禽腺病毒Fiber-2蛋白；禽减蛋综合征病毒Penton蛋白，禽减蛋综合征病毒tFiber蛋白；鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白；猪圆环病毒3型Cap蛋白；猪圆环病毒2型Cap蛋白；猪伪狂犬病病毒gB蛋白，猪伪狂犬病病毒gD蛋白；猪细小病毒VP2蛋白；猪瘟病毒E2蛋白；牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白，牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白；口蹄疫病毒VP0蛋白，口蹄疫病毒VP3蛋白，口蹄疫病毒VP1蛋白；兔瘟病毒VP60蛋白；以及日本血吸虫GALE蛋白，和日本血吸虫Wnt5蛋白。

7.根据权利要求1～2任一项所述的方法制备的高效核酸酶在抗原蛋白纯化中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其中，所述抗原蛋白选自非洲猪瘟病毒EP153R蛋白、E248R蛋白、A238L蛋白、CD2v蛋白、CP312R蛋白、P22蛋白、P30蛋白、P54蛋白和pK205R蛋白；鸡传染性贫血病毒VP1蛋白和VP2蛋白；禽腺病毒Penton蛋白，禽腺病毒Fiber-2蛋白；禽减蛋综合征病毒Penton蛋白，禽减蛋综合征病毒tFiber蛋白；鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白；猪圆环病毒3型Cap蛋白；猪圆环病毒2型Cap蛋白；猪伪狂犬病病毒gB蛋白，猪伪狂犬病病毒gD蛋白；猪细小病毒VP2蛋白；猪瘟病毒E2蛋白；牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白，牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白；口蹄疫病毒VP0蛋白，口蹄疫病毒VP3蛋白，口蹄疫病毒VP1蛋白；兔瘟病毒VP60蛋白；以及日本血吸虫GALE蛋白，和日本血吸虫Wnt5蛋白。

9.根据权利要求8所述的所述的应用，其中，所述抗原蛋白选自非洲猪瘟EP153R、E248R和A238L蛋白；以及鸡传染性贫血病毒VP1和VP2蛋白。