[发明专利]菌体中脂寡糖和寡糖的提取纯化方法

权利要求书

1.一种菌体中脂寡糖的提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、收集干菌泥；

b、将所述干菌泥与异丁酸氨水溶液混合，离心，收集上清液，所述异丁酸氨水溶液为异丁酸和浓氨水的混合物，所述浓氨水的质量浓度为22％～28％，所述异丁酸氨水溶液中的所述异丁酸与所述浓氨水的体积比为(4～6):3；

c、将步骤b得到的上清液与乙醇混合，静置，离心，收集沉淀物；

d、使用氯仿甲醇溶液对步骤c得到的沉淀物进行萃取，收集有机相；

e、对步骤d得到的有机相进行干燥；

所述氯仿甲醇溶液中的氯仿与甲醇的体积比为(1～2.5):1；

步骤b中，每克干菌泥中添加所述异丁酸氨水溶液8mL～12mL。

2.根据权利要求1所述的菌体中脂寡糖的提取纯化方法，其特征在于，步骤c中上清液与乙醇的混合物中乙醇的浓度为(75～85)mL/100mL。

3.根据权利要求1所述的菌体中脂寡糖的提取纯化方法，其特征在于，步骤d中，先使用含MgSO₄的缓冲液对步骤c得到的沉淀物进行重悬，然后再使用氯仿甲醇溶液对重悬液进行萃取。

4.根据权利要求3所述的菌体中脂寡糖的提取纯化方法，其特征在于，所述含MgSO₄的缓冲液的pH 7.4～7.8，MgSO₄浓度为1.5mmol/L～2.5mmol/L。

5.根据权利要求4所述的菌体中脂寡糖的提取纯化方法，其特征在于，每克干菌泥中所述含MgSO₄的缓冲液的使用量为5mL～10mL。

6.根据权利要求5所述的菌体中脂寡糖的提取纯化方法，其特征在于，步骤d中使用的所述氯仿甲醇溶液与所述含MgSO₄的缓冲液的体积比为1:(1～4)。

7.根据权利要求1所述的菌体中脂寡糖的提取纯化方法，其特征在于，步骤e中对所述有机相进行旋转蒸发干燥。

8.根据权利要求7所述的菌体中脂寡糖的提取纯化方法，其特征在于，旋转蒸发干燥之后包括对干燥物依次进行加水复溶、透析和真空冷冻干燥的步骤。

9.根据权利要求1所述的菌体中脂寡糖的提取纯化方法，其特征在于，步骤a包括：

a1、离心发酵液收集菌体；

a2、纯化水与菌体混匀，离心收集菌泥；

a3、将a2所得菌泥与乙醇混合，离心收集菌泥；

a4、将a3所得菌泥与甲醇混合，离心收集干菌泥。

10.根据权利要求1～9任一项所述的菌体中脂寡糖的提取纯化方法，其特征在于，所述菌体选自百日咳杆菌、大肠杆菌、副百日咳杆菌、沙门氏菌、志贺氏杆菌、假单胞菌、奈瑟氏菌、嗜血杆菌中的任意一种或多种。

11.一种菌体中寡糖的提取纯化方法，其特征在于，按照权利要求1～10任一项所述的菌体中脂寡糖的提取纯化方法得到脂寡糖，然后对所述脂寡糖进行水解及纯化。