[发明专利]一种催化乙苯等烷基苯及衍生物羟化的突变体及其应用

权利要求书

1.一种催化乙苯等烷基苯及衍生物羟化的突变体，其特征在于：突变体为细胞色素P450BM3氧化酶第87位苯丙氨酸处和第268位苏氨酸处的两个位点突变；所述突变体为：F87A-T268P、F87G-T268I-V78M、F87G-T268I-V78C、F87A-T268V-A82C、F87A-T268V-A82L、F87A-T268V- A82C-V78L、F87A-T268V- A82C-V78I。

2.一种表达载体，其特征在于：表达载体含权利要求1所述任意一项突变体。

3.一种基因工程菌，其特征在于：基因工程菌含有权利要求2所述的表达载体。

4.一种权利要求1所述的突变体的应用，其特征在于：所述权利要求1任意一项所述突变体在催化烷基苯及其衍生物羟化合成光学纯的(S)/(R)-苯基烷基醇中的应用。

5.按权利要求4所述的突变体的应用，其特征在于：所述催化体系为双功能小分子化合物、所述突变体、H₂O₂和底物；其中，双功能小分子化合物为N-(ω-咪唑基，脂肪酰基)-L-苯丙氨酸衍生物。

6.一种协同选择性催化烷基苯及衍生物羟化合成光学纯的(S)/(R)-苯基烷基醇的方法，其特征在于：利用具有双功能的小分子N-(ω-咪唑基，脂肪酰基)-L-苯丙氨酸衍生物诱导所述权利要求1所述的突变体，实现通过H₂O₂对烷基苯及衍生物的sp3 C-H键的选择性羟化调控，进而合成光学纯的(S)/(R)-苯基烷基醇。

7.按权利要求6所述的方法，其特征在于：利用双功能小分子化合物Im-C6-Phe/Im-C5-Phe诱导所述P450酶的氧化结构域突变体实现利用H₂O₂对乙苯等烷基苯及衍生物的sp3 C-H键进行高效区域及立体选择性羟化生成(R)-苯基烷基醇；

或，

利用双功能小分子化合物Im-C5-Phe诱导所述P450酶的氧化结构域突变体实现利用H₂O₂对乙苯等烷基苯及衍生物的sp3 C-H键进行高效区域及立体选择性羟化生成(S)-苯基烷基醇。