[发明专利]一株分泌组胺单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

权利要求书

1.一株分泌组胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株HLQ6B2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19182。

2.组胺单克隆抗体，其特征在于：它由权利要求1所述保藏编号为CGMCC No.19182的杂交瘤细胞株HLQ6B2分泌产生。

3.组胺半抗原的制备方法，其特征在于：所述组胺半抗原具体为用于免疫原合成的组胺半抗原A和用于包被原合成的组胺半抗原B；

组胺半抗原A的制备步骤：将组胺溶解于甲醇，然后加入4-甲酰基苯甲酸，室温搅拌过夜；随后加入NaBH₄反应，旋转蒸发得到粗产物；再硅胶柱纯化洗脱，冷乙醇冷却结晶得到组胺半抗原A；

组胺半抗原B的制备步骤：称取对苯二甲酸单甲酯溶于二氯甲烷中，持续搅拌缓慢加入组胺，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶，将该混合物室温下搅拌；反应结束后加入饱和碳酸钠溶液，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，旋转蒸发得到化合物5；将化合物5溶解于甲醇，然后加入NaOH溶液，室温搅拌过夜；反应结束后用稀盐酸调节该混合物pH值，旋转蒸发留下白色固体；硅胶柱纯化洗脱该白色固体，旋干；即得组胺半抗原B。

4.根据权利要求3所述组胺半抗原的制备方法，其特征在于组胺半抗原A的具体制备步骤为：将5mmol组胺溶解于10mL甲醇中，然后加入5mmol 4-甲酰基苯甲酸，室温搅拌过夜；随后加入15mmol NaBH₄反应30min；旋转蒸发得到粗产物；再硅胶柱纯化，CHCl₃：MeOH：NH₄OH体积比为10：5：1的混合溶液作为洗脱剂洗脱，冷乙醇冷却结晶得到组胺半抗原A。

5.根据权利要求3所述组胺半抗原的制备方法，其特征在于组胺半抗原B的具体制备步骤为：

a、称取4mmol对苯二甲酸单甲酯，将其溶于10mL二氯甲烷中，持续搅拌缓慢加入2mmol组胺，依次加入4mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.2mmol 4-二甲氨基吡啶，将该混合物室温下搅拌8h；

b、反应结束后加入10mL饱和碳酸钠溶液，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，旋转蒸发得到化合物(5)；

c、将1mmol化合物(5)溶解于5mL甲醇，然后加入2mL浓度为1M的NaOH溶液，室温搅拌过夜；

d、反应结束后使用1M的HCl溶液调节该混合物pH值至6.0，旋转蒸发留下白色固体；

e、硅胶柱纯化该白色固体，DCM：MeOH体积比为10:1的混合溶液作为洗脱剂洗脱，旋干即得组胺半抗原B。

6.组胺完全抗原的制备方法，其特征在于：具体包括免疫原组胺-KLH和包被原组胺-OVA；

免疫原组胺-KLH的制备方法如下：将组胺半抗原A溶解于N,N-二甲基甲酰胺DMF中，加入N-羟基琥珀酰亚胺NHS室温反应；随后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC室温反应得到反应液A；取蛋白KLH溶液画加入碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液，得到溶液B；随后，逐滴将反应液A液加入到溶液B液中，室温反应，即得偶联物组胺-KLH混合液，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原得到免疫原组胺-KLH。

包被原组胺-OVA的制备方法如下：将组胺半抗原B溶解于N,N-二甲基甲酰胺DMF中，加入N-羟基琥珀酰亚胺NHS室温反应；随后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC，室温反应得到反应液C；称取鸡卵清白蛋白OVA，溶解于碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液中，得到溶液D；随后，逐滴将反应液C液加入到溶液D液中，室温反应，即得偶联物组胺-OVA混合液，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原得到包被原组胺-OVA。