[发明专利]一种病毒核酸提取后浓缩的方法

说明书

本发明公开了一种病毒核酸提取后浓缩的方法，包括以下步骤：用RNA提取试剂提取标本RNA；用逆转录试剂将步骤(1)中得到的RNA进行反转录为cDNA；步骤(2)核酸保存于离心管中，用封口膜封口，用10ul枪头封口膜上扎若干小孔，在浓缩仪中进行浓缩，离心转速为16000g，温度为4℃，时间为1小时。本发明可以提高核酸浓度4‑10倍，并保持核酸活性，对环境危害小，不需要复杂操作，即可有效提高检测的灵敏度。

技术领域

本发明属于生命科学和生物技术领域，特别涉及一种病毒核酸提取后浓缩的方法。

背景技术

一项发表在《新英格兰医学杂志》上的新研究发现，导致COVID-19的病毒在固体表面和气溶胶中能持续数小时至数天。这项研究表明，人们很有可能通过空气和接触受污染物体后感染冠状病毒。科学家发现，这种病毒在气溶胶中可持续3个小时，在铜表面上可持续4小时，在纸板上可持续24小时，在塑料和不锈钢上可持续2至3天。因此有必要对固体表面进行病毒的检查。但通常固体表面的病毒含量少，容易漏检，导致假阴性，因此本发明提供一种病毒核酸提取后浓缩的技术，以提高检出率。

从样本采集开始，对固体物体，如衣物、操作台、门把手、电脑等要规范操作，要求用病毒采样管中的病毒保存液，充分浸润采样棉签后，对拟采集物体的表面重复涂抹、涮洗3次以上。同时要满足对采样对象表面，进行多点分布式采样。采集后的样品冷藏运输保存。

通常人体咽拭子采集后放置在胍盐的裂解液中，到实验室通过自动核酸提取仪进行提取，然后使用荧光定量PCR试剂进行检测。但固体表面的新冠病毒含量可能很少，达不到检测试剂盒的检测下限，这样可能会导致假阴性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种固体表面病毒核酸浓缩的方法，即真空离心浓缩的方法，可以提高核酸浓度4-10倍，并保持核酸活性，对环境危害小，不需要复杂操作，即可有效提高检测的灵敏度。

一种病毒核酸提取后浓缩的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用RNA提取试剂提取标本RNA；

(2)用逆转录试剂将步骤(1)中得到的RNA进行反转录为cDNA；

(3)步骤(2)核酸保存于离心管中，用封口膜封口，用10ul枪头封口膜上扎若干小孔，在浓缩仪中进行浓缩，离心转速为16000g，温度为4℃，时间为1小时。

进一步地，步骤(1)的具体提取步骤如下：

1)吸取560ul含有carrier RNA的buffer AVL到离心管中；

2)将140ul样本加入到装有buffer AVL-carrier RNA的离心管中，斡旋15秒，混匀；

3)室温放置10min；

4)瞬时离心，将盖子上的液滴甩回管底；

5)样品中加入560ul无水乙醇，斡旋15s充分混匀，然后瞬时离心，将盖子上的液滴甩回管底；

6)吸取630ul步骤(5)中的溶液加入column中，放入2ml离心管，8000rpm离心1min；将column放入新的2ml离心管中；

7)打开column盖子，重复第6步；直到所有的裂解液都上柱；

8)打开column盖子，加入500ul buffer AW1；盖上盖子，8000rpm离心，1min。将column放入新的2ml收集管中；

9)打开column盖子，加入500ul buffer AW2；盖上盖子，14000rpm全速离心3min；

10)将column放入新的2ml收集管中，14000rpm全速离心1min；