[发明专利]一种病毒核酸提取后浓缩的方法

权利要求书

1.一种病毒核酸提取后浓缩的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用RNA提取试剂提取标本RNA；

(2)用逆转录试剂将步骤(1)中得到的RNA进行反转录为cDNA；

(3)步骤(2)核酸保存于离心管中，用封口膜封口，用10ul枪头封口膜上扎若干小孔，在浓缩仪中进行浓缩，离心转速为16000g，温度为4℃，时间为1小时。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)的具体提取步骤如下：

1)吸取560ul含有carrier RNA的buffer AVL到离心管中；

2)将140ul样本加入到装有buffer AVL-carrier RNA的离心管中，斡旋15秒，混匀；

3)室温放置10min；

4)瞬时离心，将盖子上的液滴甩回管底；

5)样品中加入560ul无水乙醇，斡旋15s充分混匀，然后瞬时离心，将盖子上的液滴甩回管底；

6)吸取630ul步骤(5)中的溶液加入column中，放入2ml离心管，8000rpm离心1min；将column放入新的2ml离心管中；

7)打开column盖子，重复第6步；直到所有的裂解液都上柱；

8)打开column盖子，加入500ul buffer AW1；盖上盖子，8000rpm离心，1min。将column放入新的2ml收集管中；

9)打开column盖子，加入500ul buffer AW2；盖上盖子，14000rpm全速离心3min；

10)将column放入新的2ml收集管中，14000rpm全速离心1min；

11)将column放在1.5ml离心管中；加入60ul室温的buffer AVE；盖上盖子，室温放置1min；8000rpm离心1min。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)的逆转录具体步骤如下：向10ul RNA中加入1ul 100uM Primer Mix，将混合液至于65℃，5min后，冰浴2min；向上述混合液加入4ul 5×RT-Buffer，4ul DEPC水，1ul 100U/ul ReverTra Ace逆转录酶，混匀，37℃ 60min，95℃ 5min，获得cDNA-20℃备用。