[发明专利]一种通用的蛋白质组学样品制备方法及试剂盒

权利要求书

1.一种蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

蛋白质的提取和变性：向生物样本中加入含有SDS质量浓度（g/ml）在0.5%至10%的裂解液，破坏生物样本，使得蛋白质充分释放并且变性，获得蛋白质粗提液；所述裂解液含有5-20 mM还原剂、以及20-80 mM烷基化试剂；

残余SDS固定：向蛋白质粗提液中加入环糊精或环糊精衍生物溶液充分混匀，使得环糊精或环糊精衍生物与SDS的摩尔比在1-6:1之间，使得十二烷基磺酸钠与环糊精形成SDS-环糊精复合物；

酶解；加入样品中蛋白质总质量1/50至1/100的胰酶进行酶解；

脱除：在肽段纯化步骤中利用所述SDS-环糊精复合物与肽段的亲和能力不同将其分离；所述肽段纯化步骤包括脱盐、清洗和/或富集；

脱盐步骤具体包括：使用SDB-RPS填料脱除小分子盐类化合物、以及SDS-环糊精复合物，获得吸附有目标肽段的SDB-RPS填料；

所述脱除SDS-环糊精复合物，具体为采用酸性有机相清洗，所述酸性有机相pH值小于3；所述酸性有机相为1-5%的三氟乙酸或甲酸的有机相；所述有机相为乙腈、甲醇、丙酮、乙醇、乙酸乙酯、异丙醇中的一种或多种的组合；

富集步骤具体包括：使用目标肽段吸附剂吸附目标肽段，获得吸附有目标肽段的吸附剂；

洗脱：将目标肽段与填料和/或吸附剂分离，获得所述蛋白质组学样品，用于蛋白质组学检测。

2.如权利要求1所述的蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，所述脱除步骤为磷酸化肽段富集，具体包括：使用IMAC、TiO₂磷酸化肽段吸附剂吸附磷酸化肽段。

3.如权利要求1所述的蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，所述环糊精或环糊精衍生物溶液为α-环糊精溶液、β-环糊精溶液、γ-环糊精溶液、羟丙基-α-环糊精溶液、羟丙基-β-环糊精溶液、以及羟丙基-γ-环糊精溶液中一种或多种的组合。

4.如权利要求1所述的蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，所述环糊精或环糊精衍生物浓度在100 mM-250 mM之间。

5.如权利要求1所述的蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，所述有机相为异丙醇。

6.如权利要求1至5任意一项所述的蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，所述裂解液含有5-20 mM还原剂、以及20-80 mM烷基化试剂。

7.如权利要求6所述的蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，所述还原剂为TCEP和/或DTT，所属烷基化试剂为CAA和/或IAA。

8.如权利要求7所述的蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，所述裂解液含有10 mM的TCEP、以及40 mM的CAA，其pH值在7-9之间。

9.如权利要求1至5任意一项所述的蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，包括步骤：

将所述加入有裂解液的生物性样本高温裂解和/或超声辅助溶解。

10.如权利要求9所述的蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，所述高温裂解具体为：将加入有裂解液的生物性样本，加热至90-100 ℃，保温5-30分钟。

11.如权利要求9所述的蛋白质组学样品制备方法，其特征在于，所述超声辅助溶解具体为：将加入有裂解液的生物性样本，10-50 Hz超声10-60 s。

12.一种蛋白质组学样品制备试剂盒，其特征在于，包括含有十二烷基磺酸钠的裂解液、以及环糊精或环糊精衍生物溶液；所述裂解液含有质量浓度（g/mL）在0.5%至10%的十二烷基磺酸钠，所述环糊精或环糊精衍生物浓度在100 mM-250 mM之间；所述裂解液含有5-20mM还原剂、以及20-80 mM烷基化试剂。