[发明专利]条件培养基、冻干粉及制备方法和应用

权利要求书

1.一种人脂肪间充质干细胞条件培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(S1)从新鲜的人脂肪组织中分离人脂肪间充质干细胞，并进行传代培养；

(S2)取传代培养中的P3～P6代人脂肪间充质干细胞用含有FBS的DMEM/F12培养基培养至细胞生长融合度为60％～80％，然后改换成Lonza UltraCULTURE无血清培养基继续培养；

(S3)培养结束后，收集培养基上清液，并对上清液进行离心、过滤，得到的滤液即为人脂肪间充质干细胞条件培养基。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(S1)所述分离人脂肪间充质干细胞，包括：将取下的新鲜人脂肪组织用含青霉素和链霉素的PBS溶液浸泡并清洗，取下脂肪层组织，加入胶原酶震荡消化，加入PBS终止消化，然后离心处理，弃上两层，留下层脂肪细胞；

优选地，所述传代培养包括，将分离得到的下层脂肪细胞用PBS溶液重悬，然后用200～300目细胞筛过滤，离心处理，加入完全培养基重悬，接种至培养瓶培养，此时细胞代次记为P0，然后换到新的完全培养基进行传代培养。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(S3)培养48h后，收集上清液，在0～4℃，150～200×g条件下离心10～20min，弃沉淀，上清液用0.22μm的过滤膜过滤，得到的滤液即为人脂肪间充质干细胞条件培养基。

4.一种人脂肪间充质干细胞条件培养基，其特征在于，由权利要求1～3任意一项所述方法制备得到。

5.一种条件培养基冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

取权利要求1～3任一项所述方法制备的人脂肪间充质干细胞条件培养基，任选的加入糖类，进行低温速冻，然后真空冷冻干燥至粉末状，得到条件培养基冻干粉；

优选地，所述低温速冻是指迅速置于-80℃进行速冻；优选地的速冻8～12h。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述糖类为单糖、低聚糖或多糖中的一种或多种；优选所述糖类为甘露醇或海藻糖。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述糖类加入到所述人脂肪间充质条件培养基后的浓度为0％～10％(w/v)；优选0％～5％(w/v)，更优选，1.25％～2.5％(w/v)。

8.一种条件培养基冻干粉，其特征在于，由权利要求5～7任一项所述方法制备。

9.一种权利要求8所述条件培养基冻干粉在制备皮肤修复、抗皮肤衰老、修复皮肤氧化应激损伤，和/或修复皮肤紫外线损伤的产品中的应用，所述产品包括药物、护肤品或化妆品；

优选地，所述条件培养基冻干粉在使用时用DMEM培养基对其进行溶解，使终体积浓度为12.5％～100％(v/v)。

10.一种组合物，其特征在于，包含权利要求8所述的条件培养基冻干粉。