[发明专利]金樱子多糖制备方法、鉴定方法和应用

说明书

本发明属于医药及保健食品技术领域，具体涉及金樱子多糖及其制备方法、鉴定方法和应用。本发明提供的金樱子多糖的相对分子量1.26×10supgt;4/supgt;Da。本发明制备方法简单，反应条件温和，可大规模生产；且本发明对得到的高纯度金樱子多糖化学结构进行了鉴定，明确了其结构，为探究其药理活性机制提供结构依据。同时，本发明得到的金樱子多糖纯品为金樱子多糖药物、保健食品、功能食品，及其质量控制和深入研究其构效关系、作用机制奠定基础。

技术领域

本发明属于医药及保健食品技术领域，具体涉及金樱子多糖及其制备方法、鉴定方法和应用。

背景技术

免疫应答是针对入侵病原体的非特异性防御的第一线，这是生物体中的一种自我保护功能，可以调节免疫应答以治疗疾病。具有免疫刺激活性的多糖可以直接或间接与免疫系统相互作用，从而激活免疫系统以表现出生物学活性。肿瘤是世界上高发病率和高死亡率的疾病之一，它是由受损白细胞的高增殖引起的。免疫活性和抗肿瘤活性之间存在一定的关系。大多数多糖在体外和体内均具有免疫调节活性。天然多糖具有抗肿瘤活性和低毒性，可以克服耐药性，为开发抗肿瘤药物提供了丰富的资源。因此，寻找具有免疫活性和抗肿瘤作用的天然多糖具有重要意义。

多糖又称多聚糖，是一类广泛存在于动植物与微生物体内的生物大分子。对多糖的相关研究已有近70年的历史，尤其是近些年，糖生物学成为了继基因组学、蛋白质组学之后的又一大研究热点与难点，已有研究表明，多糖具有免疫调节、抗炎、抗肿瘤、降血糖、降血脂等多种生物活性，其中免疫调节作用是多糖类物质最重要的作用之一。我国在中药多糖的研究及开发利用方面近年来也取得很多成果，灵芝多糖、黄芪多糖和人参多糖等中药多糖产品已经通过分析鉴定投放市场，经过深加工的多糖保健品也相继出现。虽然中药多糖免疫调节作用的研究较多，但却不够深入。

金樱子属于蔷薇科，主要分布在中国南部。金樱子的根，花，果实和叶子均可入药。特别是，其果实被列为中国卫生部批准的新食品资源。金樱子果实具有多种药理作用，如抗氧化，降血脂，抗炎和镇痛作用等，其化学成分主要包括三萜类化合物，类固醇，酚类，单宁酸，有机酸和木聚糖。多糖是其主要活性成分之一。因此，期望将金樱子多糖开发为具有免疫调节和抗肿瘤活性的药物。

斑马鱼肿瘤移植模型已成为人类癌症转化研究的新模型，该模型可以显示出癌症生物学的重要迹象，例如肿瘤细胞增殖，转移和肿瘤抑制血管生成。斑马鱼体积小，产卵量大，胚胎透明，与人类基因的遗传相似性为87％。因此，该模型被广泛用于抗肿瘤药物和疗法的早期筛选，并可以准确地测试肿瘤特异性免疫疗法的效果，从而改善了新的抗癌疗法的发展。在天然多糖抗肿瘤活性筛选实验中，斑马鱼肿瘤移植实验所需的多糖含量较少，筛选周期短，能准确反映生物活性，为今后的肿瘤活性筛选提供了新的模式。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了金樱子多糖及其制备方法、鉴定方法和应用。本发明制备方法简单，反应条件温和，可大规模生产；且本发明对得到的高纯度金樱子多糖化学结构进行了鉴定，明确了其成分，为探究其药理活性机制提供结构依据。同时，本发明得到的金樱子多糖纯品为金樱子多糖药物、质量控制及深入研究其构效关系和作用机制奠定基础。

本发明提供了一种金樱子多糖RL1-2。发明人通过对金樱子多糖粗品提纯分离得到金樱子多糖RL1-2，且经结构分析得到其绝对分子量为1.26×10⁴g/mol。

进一步地，所述金樱子多糖RL1-2的结构如图9所示.

同时，本发明也提供了金樱子多糖的制备方法，包括以下步骤：

S1水提：将金樱子果实加入水中，加热提取，过滤，得提取液和药渣；

S2分级醇沉：

将步骤S1所得提取液减压浓缩，得浓缩液1；向浓缩液1中加入乙醇，至乙醇体积浓度为a％，静置，收集沉淀和上清液，得粗多糖RL1和上清液1；