[发明专利]热敏感的菊粉酶突变体MutY119N及其应用

权利要求书

1.热盐性改变的热敏感的菊粉酶突变体MutY119N，其特征在于，该热敏感的菊粉酶突变体MutY119N的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的热敏感的菊粉酶突变体MutY119N的编码基因mutY119N。

3.根据权利要求2所述的编码基因mutY119N，其特征在于，该编码基因mutY119N的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.包含如权利要求2或3所述的编码基因mutY119N的重组载体。

5.包含如权利要求2或3所述的编码基因mutY119N的重组菌。

6.如权利要求1所述的热敏感的菊粉酶突变体MutY119N的制备方法，其特征在于，该制备方法包含：

(1)将核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的野生外切菊粉酶基因inuAMN8和表达载体pEasy-E1相连接，获得包含inuAMN8的重组表达质粒pEasy-E1-inuAMN8；

(2)以质粒pEasy-E1-inuAMN8为模板，采用的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQID NO.8所示，通过PCR扩增得到包含mutY119N的重组表达质粒pEasy-E1-mutY119N；

(3)将重组表达质粒pEasy-E1-mutY119N转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得包含mutY119N的重组菌株；

(4)培养重组菌株，诱导重组外切热敏感的菊粉酶突变体MutY119N表达；

(5)回收并纯化所表达的重组外切热敏感的菊粉酶突变体MutY119N。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述包含mutY119N的重组菌株的制备为，将所述重组表达质粒pEasy-E1-mutY119N经DpnI酶消化，利用Mut  II FastMutagenesis Kit试剂盒将消化产物进行连接，再通过热激方式转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述诱导采用IPTG进行诱导。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述包含mutY119N的重组菌株的表达产物经Nickel-NTAAgarose和0～500mM的咪唑分别亲和和纯化，获得重组外切热敏感的菊粉酶突变体MutY119N。

10.如权利要求1所述的突变体MutY119N在食品中的应用。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述的突变体MutY119N在酿酒中的应用。