[发明专利]一种提高苹果砧木组培苗快繁效率的方法

说明书

本发明公开了一种提高苹果砧木组培苗快繁效率的方法，包括外植体接种、一次快速继代培养、回复继代培养、二次快速继代培养和缩时继代培养的步骤。采用本发明的方法可在缩时继代培养时，20‑25天增殖系数为6.11倍左右，高度为5.23cm左右，且可保持同样的增值系数达5代以上，不仅大幅提高了苹果砧木组培苗的生长速度及增值系数，而且缩短了传统的苹果砧木的组培1/3‑1/2的时间，可加快苹果砧木组培苗的优质高效生产。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种双快一回复提高苹果砧木组培苗快繁效率的方法。

背景技术

苹果栽培主要以砧木嫁接接穗培养苗木的形式存在，砧木对苹果的生长发育，果实品质产量及各种生物非生物胁迫抗性等具有重要影响。因此，高效繁育苹果砧木，一直是国内外研究重点。

组织培养技术为苹果砧木快繁开辟了新的途径。目前已有大量的苹果砧木及新品种通过组织培养途径建立了快繁体系。王淼淼等研究发现苹果矮化砧木“矮砧6号”适宜增殖培养的植物生长调节剂配比为6-BA1.0mg/L+NAA0.05～0.10mg/L,增殖系数达到每4周4.53倍；孙清荣等以苹果抗寒半矮化砧木“54-118”为试材，研究发现，无菌苗的适宜增殖培养基为QL+6-BA1mg/L+IBA0.3mg/L+30g/L蔗糖，增殖系数为4.2倍。

然而，目前苹果砧木组织培养技术普遍存在效率较低、培养周期长等问题，4倍左右的增值系数不能满足大规模生产的快速扩繁要求，浪费了一定的人力和物力，不利于苹果砧木脱毒苗的推广。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种提高苹果砧木组培苗快繁效率的方法。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种双快一回复提高苹果砧木组培苗快繁效率的方法，包括以下步骤：

(1)将苹果砧木外植体接种到诱导培养基中，培养20-25天，形成不定芽芽丛；

所述诱导培养基为添加有0.6mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的 MS培养基；

(2)切取步骤(1)培养后形成的不定芽芽丛接种到一次快速继代培养基中，连续继代培养3代，每代培养10-15天；

所述一次快速继代培养基为添加有1mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.5g/L 琼脂的MS培养基；

(3)将步骤(2)连续继代培养后的组培苗接种到回复继代培养基中，继代培养1代，培养20-25天；

所述回复继代培养基为添加有0.6mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基；

(4)将步骤(3)回复继代培养基中培养1代后获得的组培苗接种到二次快速继代培养基中，二次连续继代3代，每代培养10-15天；

所述二次快速继代培养基为添加有1mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.5g/L 琼脂的MS培养基；

(5)将步骤(4)二次快速继代培养3代后的组培苗接种到缩时继代培养基中，继代培养1-5代，每代培养20-25天；

所述缩时继代培养基为添加有0.6mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基。

优选的，步骤(1)中，所述苹果砧木外植体由如下方法制成：