[发明专利]一种提高苹果砧木组培苗快繁效率的方法

权利要求书

1.一种双快一回复提高苹果砧木组培苗快繁效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将苹果砧木生长健壮的嫩枝剪成茎段作为苹果砧木外植体接种到诱导培养基中，培养20-25天，形成不定芽芽丛；

所述诱导培养基为添加有0.6mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基；

（2）切取步骤（1）培养后形成的不定芽芽丛，将其斜切成茎段，接种到一次快速继代培养基中进行第一次快速继代培养，共培养3代，每代培养10-15天；分别将在一次快速继代培养基上长出的茎尖进行第二次及第三次快速继代；

所述一次快速继代培养基为添加有1mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基；

（3）将步骤（2）中连续继代3代后长出的茎尖接种到回复继代培养基中，继代培养1代，培养20-25天；

所述回复继代培养基为添加有0.6mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基；

（4）将步骤（3）中经回复继代培养基培养后长出的不定芽芽丛接种到二次快速继代培养基中，二次连续继代3代，每代培养10-15天；

所述二次快速继代培养基为添加有1mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基；

（5）将步骤（4）中经二次连续继代培养的茎尖接种到缩时继代培养基中，继代培养1-5代，每代培养20-25天；

所述缩时继代培养基为添加有0.6mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基；

步骤（1）中，苹果砧木外植体在诱导培养基中的培养条件为：温度为25±2℃，光照时间为10 h/d，光照强度为1000 lx；

步骤（2）中，连续继代培养的条件为：温度为25±2℃，光照时间为10 h/d，光照强度为1000 lx；

步骤（3）中，回复培养的条件为：温度为25±2℃，光照时间为10 h/d，光照强度为1000lx；

步骤（4）中，二次连续继代培养的条件为：温度为25±2℃，光照时间为10 h/d，光照强度为1000 lx；

步骤（5）中，缩时继代培养的条件为：温度为25±2℃，光照时间为10 h/d，光照强度为1000 lx。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述苹果砧木外植体由如下方法制成：

选取苹果砧木生长健壮的嫩枝，将其剪成2.5-3.5cm的带新梢的茎段，清水冲洗后，用75%的酒精侵泡30 s，后将其置于0.05%的次氯酸钠溶液种消毒10 min，用无菌水清洗3次，每次30 s；用已灭菌的解剖刀将茎段底部往上0.5 cm位置切出一斜切口。