[发明专利]具有增加的头孢唑啉生产率的青霉素G酰化酶突变体及其用途

权利要求书

1.一种突变型青霉素G酰化酶，其在包含由SEQ ID NO:1限定的α亚基以及由SEQ IDNO:2限定的β亚基的野生型青霉素G酰化酶蛋白序列中，包含选自A116αT、I156αN、N169αT、M3βV、S54βG、T64βA、H173βN、T251βA、T388βA、R478βH、E486βA、D541βE和Y555βC的至少一种突变。

2.根据权利要求1的突变型青霉素G酰化酶，其中所述野生型青霉素G酰化酶蛋白序列包含I156αN、N169αT、H173βN、T251βA、E486βA和Y555βC的突变。

3.根据权利要求2的突变型青霉素G酰化酶，其中所述突变型青霉素G酰化酶包含由SEQID NO:5限定的α亚基；以及由SEQ ID NO:6限定的β亚基。

4.根据权利要求2的突变型青霉素G酰化酶，其中所述突变型青霉素G酰化酶进一步包含选自G49αF、T201αS、M3βV、T64βA、T225βN和T388βA的至少一种突变。

5.根据权利要求4的突变型青霉素G酰化酶，其中所述突变型青霉素G酰化酶包含M3βV、T64βA和T388βA的突变。

6.根据权利要求5的突变型青霉素G酰化酶，其中所述突变型青霉素G酰化酶包含由SEQID NO:5限定的α亚基；以及由SEQ ID NO:8限定的β亚基。

7.根据权利要求4的突变型青霉素G酰化酶，其中所述突变型青霉素G酰化酶进一步包含选自S54βG、S150βT、N226βT、A310βD、R478βH和D541βE的至少一种突变。

8.根据权利要求7的突变型青霉素G酰化酶，其中所述突变型青霉素G酰化酶包含S54βG、R478βH和D541βE的突变。

9.根据权利要求8的突变型青霉素G酰化酶，其中所述突变型青霉素G酰化酶包含由SEQID NO:5限定的α亚基；以及由SEQ ID NO:10限定的β亚基。

10.一种多核苷酸，其编码权利要求1至9中任一项的突变型青霉素G酰化酶。

11.一种重组表达载体，其包含权利要求10的多核苷酸。

12.一种宿主细胞，其用权利要求11的表达载体进行转化。

13.根据权利要求12的转化宿主细胞，其中所述宿主细胞是选自以下的任何一个属的微生物：梭菌属物种(Clostridia spp.)、埃希氏菌属物种(Escherichia spp.)、醋杆菌属物种(Acetobacter spp.)、气单胞菌属物种(Aeromonas spp.)、产碱菌属物种(Alcaligenes spp.)、隐毛幼枝菌属物种(Aphanocladium spp.)、芽孢杆菌属物种(Bacillus spp.)、头孢菌属物种(Cephalosporium spp.)、黄杆菌属物种(Flavobacteriumspp.)、克吕沃尔氏菌属物种(Kluyvera spp.)、枝动菌属物种(Mycoplana spp.)、精朊杆菌属物种(Protaminobacter spp.)、假单胞菌属物种(Pseudomonas spp.)、无色杆菌属物种(Achromobacter spp.)和黄单胞菌属物种(Xanthomonas spp.)。

14.根据权利要求13的转化宿主细胞，其中所述埃希氏菌属的微生物是用重组表达载体转化的大肠杆菌MC1061/pBC-ZSH3-1(大肠杆菌MC1061/pBC-ZSH3-1，保藏号KCTC13991BP)，所述重组表达载体包含编码SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:10的氨基酸序列的多核苷酸。