[发明专利]永生化干细胞株的制备方法及其用途

说明书

本发明涉及永生化干细胞株的制备方法及其用途，上述永生化干细胞株为引入永生化基因的干细胞株，其特征在于，在抑制增殖的同时保持引入基因的表达能力，以便能够用作细胞治疗剂，本发明的上述永生化干细胞株经过照射放射线的过程，由此具有在不使细胞增殖的同时使引入的外源蛋白的表达保持在规定水平以上的特征，从而可有用地用作各种细胞治疗剂等临床试样。

技术领域

本发明涉及如下的永生化干细胞株的制备方法及其用途：在抑制增殖的同时保持引入基因的表达能力，以便能够用作细胞治疗剂。

背景技术

在世界范围内正在开发利用细胞的治疗方法，尤其，正在进行大量的利用成体干细胞的细胞治疗剂的研究。作为成体干细胞的间充质干细胞(Mesenchymal Stem cell；MSC)为可分化为骨、软骨、肌肉、脂肪、成纤维细胞等的多能(multipotent)细胞。上述MSC较容易从骨髓、脐带血、脂肪等各种成体组织中获得。MSC具有迁移到炎症或损伤部位的特异性，还具有作为用于传递治疗药物的载体的巨大优势。并且，可通过抑制或激活如T细胞、B细胞、树突状细胞及自然杀伤细胞的免疫细胞的功能来调节人体的免疫功能。而且，MSC具有可在试验管内(in vitro)较容易培养的优点。由于这种特性，正在积极进行将MSC用作细胞治疗剂的研究。

但是，即使MSC具有如上所述的优点，但生产临床级MSC作为细胞治疗剂时具有如下的问题。第一，MSC的增殖受限，因此难以大量生产其。第二，所获得的MSC混合有各种细胞，当生产时，难以保持相同的效果。第三，在仅利用MSC的情况下，治疗效果不佳。最后，还具有注入人体的MSC在体内成为癌细胞的可能性。

另外，在韩国授权专利第1585032号中公开了包含在水凝胶中培养的间充质干细胞的细胞治疗剂。在上述文献中，提供了在分离用作细胞治疗剂的间充质干细胞的工序中，缩短预处理过程来提供能够直接给药的组合物，但完全没有提及如上所述的间充质干细胞的问题及用于解决其的方案。因此，需要研究可用作细胞治疗剂的安全且有效的间充质干细胞。

发明内容

技术问题

由此，本发明人为了研发可大量生产且长期培养中也可保持相同效果的干细胞治疗剂而进行研究的结果，确认了如下的事实，即，在向本发明的引入永生化基因及外源基因的干细胞照射特定范围的放射线的情况下，稳定地保持引入的外源基因的蛋白质表达，但抑制了干细胞的增殖，从而完成了本发明。

即，本发明的目的在于，提供包括向引入永生化基因及外源基因的永生化干细胞株照射放射线的步骤的永生化干细胞株的制备方法及制备的永生化干细胞株。

本发明的另一目的在于，提供利用制备的上述永生化干细胞的药剂学组合物。

技术方案

为了实现上述目的，本发明提供永生化干细胞株的制备方法，其包括如下的步骤：制备引入永生化基因的干细胞株；向上述干细胞株引入编码外源蛋白的基因；冷冻保存上述干细胞株；以及向冷冻状态的上述干细胞株照射放射线。

并且，本发明提供药剂学组合物，其包含通过上述方法制备的永生化干细胞株作为细胞治疗剂。

以下，详细说明本发明。

在一方面，本发明提供永生化干细胞株的制备方法，其包括如下的步骤：制备引入永生化基因的干细胞株；向上述干细胞株引入编码外源蛋白的基因；冷冻保存上述干细胞株；以及向冷冻状态的上述干细胞株照射放射线。

本发明的永生化干细胞株的特征在于，引入永生化基因，由此，在长期传代培养中也可保持干细胞的特性，在大量生产中也能够保持相同的品质，从而可稳定地大量生产。

尤其，在上述制备过程中，引入向冷冻保存的干细胞株照射放射线的步骤，由此，不使引入永生化基因的干细胞增殖，同时，可长时间稳定地表达引入的蛋白质，从而可安全地用作细胞治疗剂。