[发明专利]人工抗原特异性免疫调控性T(AIRT)细胞

权利要求书

1.一种人工CD4+CD25+抗原特异性免疫调控性T(airT)细胞，所述细胞包含：

(a)叉头框蛋白3/翼状螺旋转录因子(FOXP3)基因的人工修饰，其中，经修饰的所述基因组成型地表达FOXP3基因产物，所述FOXP3基因产物的FOXP3表达水平等于或高于天然存在的调控性T(Treg)细胞的FOXP3表达水平；以及

(b)至少一个经转导的多核苷酸，所述经转导的多核苷酸编码抗原特异性T细胞受体(TCR)多肽。

2.一种人工CD4+CD25+抗原特异性免疫调控性T(airT)细胞，所述细胞通过CD4+CD25ˉT细胞中的叉头框蛋白3/翼状螺旋转录因子(FOXP3)基因的人工修饰以及至少一个经转导的多核苷酸而获得，其中，所述人工修饰使得airT细胞组成型地表达FOXP3基因产物，所述FOXP3基因产物的FOXP3表达水平等于或高于天然存在的调控性T(Treg)细胞的FOXP3表达水平；所述经转导的多核苷酸编码抗原特异性T细胞受体(TCR)多肽。

3.如权利要求1或2所述的airT细胞，其中，所述FOXP3基因存在于包含内含子调控性T细胞(Treg)特异性去甲基化区域(TSDR)的FOXP3基因座中，所述TSDR具有多个胞嘧啶-鸟嘌呤(CG)二核苷酸，其中，每个CG二核苷酸包含甲基化胞嘧啶(C)核苷酸，所述甲基化胞嘧啶(C)核苷酸位于包含天然存在的Treg细胞中的去甲基化C核苷酸的核苷酸位置处。

4.如权利要求3所述的airT细胞，其中，位于包含天然存在的Treg细胞中的去甲基化C核苷酸的核苷酸位置处的TSDR C核苷酸的至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％被甲基化。

5.如权利要求1-4中任一项所述的airT细胞，其中，所述FOXP3基因产物以足以使所述airT细胞在体外维持CD4+CD25+表型至少21天的水平表达。

6.如权利要求1-5中任一项所述的airT细胞，其中，所述FOXP3基因产物以足以使所述airT细胞在过继性转移至需要抗原特异性免疫抑制的免疫相容性哺乳动物宿主后在体内维持CD4+CD25+表型至少60天的水平表达。

7.如权利要求1-6中任一项所述的airT细胞，其中，所述细胞包含选自以下的一种或多种中的表型：(i)HeliosLo、(ii)CD152+、(iii)CD127^ˉ和(iv)ICOS+。

8.如权利要求1-7中任一项所述的airT细胞，其中，所述人工修饰包括所述细胞中的天然FOXP3基因座的敲除。

9.如权利要求1-8中任一项所述的airT细胞，其中，所述人工修饰包含插入的核酸分子，所述插入的核酸分子包含位于所述细胞的天然FOXP3基因座处的组成型活化的启动子，其中，所述启动子定位于所述FOXP3基因中以能够促进FOXP3基因座的内源的编码FOXP3的核苷酸序列的转录。

10.如权利要求9所述的airT细胞，其中，所述插入的核酸分子进一步包含编码第一化学诱导信号复合物(CISC)组分的核酸序列，所述第一CISC组分能够与CISC诱导物分子特异性结合。

11.如权利要求10所述的airT细胞，其中，编码所述TCR多肽的所述经转导的多核苷酸进一步包含编码第二化学诱导信号复合物(CISC)组分的核酸序列，所述第二CISC组分不同于所述第一CISC组分并且能够与所述CISC诱导物分子特异性结合。

12.如权利要求11所述的airT细胞，其中，编码所述第一CISC组分的所述核酸序列和编码所述第二CISC组分的所述核酸序列进一步包含编码第三CISC组分的核酸序列，所述第三CISC组分不同于所述第一CISC组分和所述第二CISC组分并且能够与所述CISC诱导物分子特异性结合。