[发明专利]由RAG失活的iPSC产生T细胞

说明书

本发明涉及通过表达外源性T细胞受体(TCR)而将重组激活基因(RAG)失活的祖细胞分化为T细胞。T细胞群可通过以下方法产生：(i)将RAG失活的诱导多能干细胞(iPSC)群分化为中胚层细胞，(ii)将所述中胚层细胞(MC)分化以产生造血内皮细胞(HEC)群，(iii)将所述HEC分化为造血祖细胞(HPC)群，(iv)将所述HPC群分化为T细胞祖细胞；和(v)使所述T细胞祖细胞成熟以产生双阳性CD4+CD8+T细胞群。所述方法还可包括将编码抗原受体(例如T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR))的异源核酸引入下组之一：RAG失活的(a)iPSC，(b)MC，(c)HEC，(d)HPC或(e)祖细胞T细胞。这可能有助于例如生产用于免疫治疗的T细胞。

技术领域

本发明涉及由RAG失活的祖细胞，例如诱导多能干细胞(induced pluripotentstem cells,iPSCs)产生T细胞的方法。

背景技术

免疫疗法有望带来长期生存，从而有望改变癌症治疗领域(McDermott等人，《癌症治疗综述》“Cancer Treat Rev”.2014年10月；40(9):1056-64)。医疗需求显然尚未满足，需要新的免疫调节药物以扩大患者群体和肿瘤类型的范围。此外，需要新的试剂来提高抗肿瘤应答的幅度和持续时间。由于过去二十年来对控制T细胞免疫的基本原理的深入理解，这些试剂的开发成为可能(Sharma和Allison，《细胞》“Cell”.2015年4月9日；161(2):205-14)。这通常需要肿瘤特异性CD4+和CD8+T细胞识别MHC分子呈递的肿瘤相关肽抗原。不同的疫苗接种策略和体外扩增的肿瘤浸润淋巴细胞的过继转移在某些情况下证明了肿瘤特异性T细胞治疗晚期癌症的能力(Rosenberg等人，《自然医学》“Nat Med”.2004年9月；10(9):909-15)。

然而，目前的过继性T细胞疗法由于缺乏合适的患者和肿瘤特异性T细胞而受到限制，并且为了有效地用于免疫治疗，需要有足够治疗的和功能性的抗原特异性T细胞。

内源性T细胞受体(endogenous T cell receptors,TCRs)的表达可导致治疗性给药时T细胞产生非靶向毒性。虽然内源性TCR的表达原则上可通过重组激活基因1(recombination activating gene 1,RAG1)和/或重组激活基因2(RAG2)的失活来阻止，但这种失活也会阻止前体细胞分化为淋巴细胞谱系(Mombaerts等人，(1992)《细胞》“Cell”68(5)869-877)。

发明概述

本发明人已经认识到，RAG失活的祖细胞分化为T细胞的能力可以通过外源性T细胞受体(TCR)的表达来恢复。这可能有助于例如生产用于免疫治疗的T细胞。

本发明的第一方面提供一种产生T细胞群的方法，所述方法可包括：

(i)将诱导多能干细胞(iPSC)群分化为中胚层细胞(mesoderm cells,MCs)，

(ii)将所述MC分化以产生造血内皮细胞(haemogenic endothelial cells,HECs)群，

(iii)将所述HEC分化为造血祖细胞(haematopoietic progenitor cells,HPCs)群，

(iv)将所述HPC群分化为T细胞祖细胞(progenitor T cells)；和

(v)使所述T细胞祖细胞成熟以产生双阳性CD4+CD8+T细胞群，

其中，所述方法包括

(a)失活下组之一的RAG：(a)iPSC，(b)MC和(c)HEC；和