[发明专利]由RAG失活的iPSC产生T细胞

权利要求书

1.一种产生T细胞群的方法，其特征在于，所述方法包括：

(i)将RAG失活的诱导多能干细胞(iPSC)群分化为中胚层细胞，

(ii)将所述中胚层细胞(MC)分化以产生造血内皮细胞(HEC)群，

(iii)将所述HEC分化为造血祖细胞(HPC)群，

(iv)将所述HPC群分化为T细胞祖细胞；和

(v)使所述T细胞祖细胞成熟以产生双阳性CD4+CD8+T细胞群，

其中所述方法包括将编码抗原受体的异源核酸引入下组之一：(a)iPSC，(b)所述HPC，或(c)所述T细胞祖细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：

(vi)激活和扩增所述T细胞，以产生单阳性CD8+T细胞群或单阳性CD4+T细胞群。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法包括将所述异源核酸引入所述iPSC。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法包括将所述异源核酸引入所述HPC。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法包括将所述异源核酸引入所述T细胞祖细胞。

6.如前述任一权利要求所述的方法，其特征在于，所述编码抗原受体的异源核酸包含在表达载体中。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述表达载体为慢病毒载体或腺相关病毒(AAV)载体。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述慢病毒载体为VSVg假型病毒载体。

9.如前述任一权利要求所述的方法，其特征在于，所述抗原受体为T细胞受体(TCR)。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述TCR是亲和力增强的TCR。

11.如权利要求9或10所述的方法，其特征在于，所述TCR是αβTCR或γδTCR。

12.如权利要求9至11中任一项所述的方法，其特征在于，所述TCR特异性结合MHC，所述MHC呈递细胞表达的靶抗原的肽片段，或所述TCR独立于MHC呈递而特异性结合细胞表达的靶抗原或其肽。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述TCR特异性结合MHC，所述MHC呈递癌细胞表达的肿瘤抗原的肽片段，或所述TCR独立于MHC呈递而特异性结合癌细胞表达的肿瘤抗原或其肽片段。

14.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原受体是嵌合抗原受体(CAR)。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述CAR与细胞表达的靶抗原特异性地结合。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述TCR与所述癌细胞表达的肿瘤抗原特异性地结合。

17.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原受体是NK细胞受体(NKCR)。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述NKCR特异性结合MHC，所述MHC呈递由细胞表达的靶抗原的肽片段。

19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述NKCR受体特异性结合MHC，所述MHC呈递由所述癌细胞表达的肿瘤抗原的肽片段。