[发明专利]从人多能干细胞快速且确定性地产生小胶质细胞

权利要求书

1.一种用于从干细胞产生小胶质细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

a)将编码转录调节蛋白的核苷酸序列靶向插入第一基因组安全港位点；和

b)将转录因子PU.1的编码序列(SEQ ID NO:1)靶向插入第二基因组安全港位点，其中所述基因与诱导型启动子可操作地连接，所述诱导型启动子由转录调节蛋白调节；表达PU.1(SEQ ID NO:2)；以及

c)通过暴露于至少一种生长因子或小分子来培养从步骤a)和b)收获的干细胞，所述至少一种生长因子或小分子重现了在小胶质细胞的胚胎发育或成体小胶质细胞增殖、分化或极化的至少一个阶段期间的信号传导。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种生长因子或小分子选自活化素A(SEQID NO:7)、BMP4(SEQ ID NO:8)、FGF(SEQ ID NO:9)、VEGF-A(SEQ ID NO:10)、LY294002、CHIR99021、SCF(SEQ ID NO:11)、IL-3(SEQ ID NO:12)、IL-6(SEQ ID NO:13)、CSF1(SEQ IDNO:14)、IL-34(SEQ ID NO:15)、CSF2(SEQ ID NO:16)、CD200(SEQ ID NO:17)、CX3CL1(SEQID NO:18)、TGFβ1(SEQ ID NO:19)和IDE1。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述至少一种生长因子是CSF1(SEQ ID NO:14)或IL-34(SEQ ID NO:15)。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种小分子是CHIR99021、LY294002或IDE1。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一和第二基因组安全港位点是不同的。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括转录因子CEBPB的基因的编码序列(SEQ ID NO:3)的插入及其表达。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括转录因子RUNX1的基因的编码序列(SEQ ID NO:4)的插入及其表达。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括转录因子IRF8的基因的编码序列(SEQ ID NO:5)的插入及其表达。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括转录因子SALL1的基因的编码序列(SEQ ID NO:6)的插入及其表达。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述转录调节蛋白是反向四环素反式激活蛋白(rtTA)(SEQ ID NO:20)，并且其活性受强力霉素或四环素控制。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述诱导型启动子包括Tet应答元件(TRE)(SEQ ID NO:21)。