[发明专利]用于寡核苷酸的脱保护的方法

权利要求书

1.一种用于寡核苷酸的纯化的方法，所述方法包括通过用酸进行柱上脱保护来去除所述寡核苷酸的5'-O-寡核苷酸末端处的酸不稳定的5'羟基保护基团。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述柱是离子交换色谱柱，优选地是阴离子交换色谱柱。

3.根据权利要求1至2所述的方法，其中所述酸不稳定的5'羟基保护基团选自4,4'-二甲氧基三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、三苯甲基、9-苯基-呫吨-9-、9-(对甲苯基)-呫吨-9-基，或选自叔丁基二甲基甲硅烷基，优选地选自4,4'-二甲氧基三苯甲基。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述方法包括以下步骤

a.用包含磷酸盐和有机溶剂的缓冲溶液对阴离子交换柱进行第一平衡；

b.将粗制寡核苷酸的稀释的氨水溶液装载到所述柱上；

c.用包含磷酸盐和有机溶剂的缓冲溶液对所述阴离子交换柱进行第二平衡；

d.用包含磷酸盐、有机溶剂和碱卤化物的缓冲溶液洗涤所述柱；

e.用包含磷酸盐和有机溶剂的缓冲溶液对所述阴离子交换柱进行第三平衡；

f.所述用酸进行柱上脱保护；

g.用包含磷酸盐和有机溶剂的缓冲溶液对所述阴离子交换柱进行第四平衡；

h.用包含磷酸盐、有机溶剂和碱卤化物的缓冲溶液对脱保护的寡核苷酸进行洗脱，并且随后用包含磷酸盐、有机溶剂和碱卤化物的缓冲溶液对所述柱进行等度洗涤。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述缓冲溶液中的所述磷酸盐是选自碱磷酸盐或其混合物的磷酸盐，但优选地是磷酸一钠或磷酸二钠或其混合物。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述缓冲溶液中的所述磷酸盐的含量在10mM和40mM之间选择，优选地在20mM和30mM之间选择。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中装载到所述柱上的所述氨水溶液的总寡核苷酸含量为每L柱体积8g至20g、优选地每L柱体积10g至15g。

8.根据权利要求4或7中任一项所述的方法，其中所述缓冲溶液中的所述有机溶剂选自极性质子溶剂或极性非质子溶剂，优选地选自极性非质子溶剂，更优选地选自乙腈。

9.根据权利要求4至8中任一项所述的方法，其中所述碱卤化物是氯化钠。

10.根据权利要求4至9中任一项所述的方法，其中洗涤步骤d)中的所述缓冲溶液包含0.2M至1.0M、优选地0.4M至0.7M氯化钠。

11.根据权利要求4至10中任一项所述的方法，其中洗脱步骤h)中的所述缓冲溶液包含1.5M至3.0M、优选地1.8M至2.5M氯化钠。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述酸是质子酸。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述酸是乙酸，优选地是乙酸水溶液，其中乙酸在水中的浓度为按重量计50％至95％、更优选地为按重量计70％至90％、甚至更优选为按重量计75％至85％。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中柱上脱保护步骤f)中酸溶液的流速在1.5L/min和2.5L/min之间选择。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中步骤a)至e)和步骤g)至h)中的所述缓冲溶液的流速在2.0L/min和3.0L/min之间选择。