[发明专利]一种纯化维拉卡肽的方法

说明书

本发明公开了一种固相合成维拉卡肽的纯化方法，多肽药物制备技术领域。该方法先将固相合成的维拉卡肽粗样溶于水中；粗肽溶液加入等体积的乙腈溶液、饱和氯化钠溶液析出，所得固体用水溶解后过滤，用C18反相色谱柱，以0.2％盐酸为A相，乙腈为B相，梯度洗脱得到纯度大于99.00％的样品；样品用C18反相色谱柱，以50mmol/L氯化铵溶液为A相，乙腈为B相，梯度为5％‑5％，完成离子交换，再以0.1％盐酸水溶液进为A相，乙腈为B相，先梯度平衡，再梯度洗脱得到转盐样品；转盐样品减压浓缩，冷冻干燥得到维拉卡肽终产品。本发明方法大大提高了处理量，缩短了生产周期，适合工业化大规模生产，提高了产率，降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及多肽药物制备技术领域，特别涉及一种纯化维拉卡肽的方法。

背景技术

继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT，简称继发性甲旁亢)，是指在慢性肾功能不全、肠吸收不良综合征、Fanconi综合征和肾小管酸中毒、维生素D缺乏或抵抗以及妊娠、哺乳等情况下，甲状旁腺长期受到低血钙、低血镁或高血磷的刺激而分泌过量的甲状旁腺激素(PTH)，以提高血钙、血镁和降低血磷的一种慢性代偿性临床表现，长期的甲状旁腺增生最终导致形成功能自主的腺瘤。

维拉卡肽是由KaiPharmaceuticals,Inc.开发的一种新颖的拟钙剂(calcimimeticagent)，能够抑制甲状旁腺激素的分泌。维拉卡肽可结合并激活甲状旁腺上的钙敏感受体，实现甲状旁腺激素水平的降低。维拉卡肽可以再进行血液透析的同事通过静脉给药，这对于每天都需要使用大量药物的慢性肾病患者来说是一个福音。因此，velcalcetide很有可能超过Sensipar。分析师预期维拉卡肽的年销售峰值出现在2023年，为10亿美元。所以，对维拉卡肽的纯化方法的研究具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术一次性处理量较少、步骤繁琐、损耗过大且得到维拉卡肽纯度较低收率较低的技术问题，提供一种新的适用于维拉卡肽的纯化方法。

本发明的技术方案如下：一种纯化维拉卡肽的方法，包括以下步骤：

(1)将固相合成的维拉卡肽粗样溶于水中，得粗液；

(2)取粗肽溶液加入等体积的乙腈溶液，样品在溶液中析出，再加入等体积的饱和氯化钠溶液促进样品析出，过滤得固体；

(3)将滤出的固体用水溶解，过滤，用C18反相色谱柱，以0.2％盐酸为A相，乙腈为B相，梯度为20％-30％，检测波长为220nm进行HPLC线性洗脱，得到纯度大于99.00％，单杂小于0.1％的样品；

(4)所得样品，用C18反相色谱柱，以50mmol/L氯化铵溶液为A相，乙腈为B相，梯度为5％-5％，完成离子交换，再以0.1％盐酸水溶液进为A相，乙腈为B相，先以5％-5％的梯度平衡，后再以50％-50％的梯度洗脱得到转盐样品；

(5)将转盐后的样品进行减压浓缩，冷冻，极限真空干燥，得到维拉卡肽终产品。

以上所述的一种纯化维拉卡肽的方法，其进一步优选的技术方案是：

(1)将固相合成的维拉卡肽粗样溶于水中，得粗液；

(2)取粗肽溶液加入等体积的乙腈溶液，样品在溶液中析出，再加入等体积的饱和氯化钠溶液促进样品析出，过滤，保留固体；

(3)将滤出的固体用水溶解，经0.45um水系膜过滤后，用C18反相色谱柱，以0.2％盐酸为A相，乙腈为B相，梯度为20％-30％，时间为60min，检测波长为220nm进行HPLC线性洗脱，得到纯度大于99.00％，单杂小于0.1％的样品；