[发明专利]大豆的GmVIT1基因的应用和含有GmVIT1基因的重组载体

说明书

本发明公开了大豆的GmVIT1基因的应用和含有GmVIT1基因的重组载体，属于基因工程技术领域，本发明为了解决如何促进植物提高结籽率的问题，本发明提供了一种促进植物提高结籽率的方法，通过构建重组载体pBI121‑GmVIT1，将重组载体转入到农杆菌中制备携带GmVIT1基因的农杆菌，然后利用农杆菌介导的叶盘法得到携带GmVIT1基因的转基因植物，通过培养携带GmVIT1基因的转基因植物，发现携带GmVIT1基因的转基因植物的生长状态良好，花序较野生型增大，小花数增多，总结籽量与野生型相比有了显著提高，说明GmVIT1基因可以提高植物结籽率。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及大豆的GmVIT1基因的应用和含有GmVIT1基因的重组载体。

背景技术

大豆(GlycineMax L.)是一种非常重要的经济作物，大豆基因库中蕴含着丰富的遗传资源。发掘有益的基因资源并用于提高作物产量是一条可用的途径。种植作物品种主要以结籽量大、适应性广和生长势强等特征作为指标。结籽量是构成作物产量的重要组成部分，也是良种繁育的主要技术指标。结籽量低严重影响作物产量与质量的稳定性，也不利于作物的良种繁育。提高植物的结籽率具有非常大的经济效益。

发明内容

本发明的目的是为了解决如何提高植物的结籽率的问题，本发明为了解决上述的问题，本发明提供了大豆的GmVIT1基因在促进植物结籽中的应用。

进一步地限定，所述的GmVIT1基因的序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步地限定，所述的植物为烟草。

本发明还提供了一种含有GmVIT1基因的重组载体，所述载体为重组载体pBI121-GmVIT1。

进一步地限定，大豆的GmVIT1基因在促进植物结籽的方法，具体步骤如下：

(1)构建上述的重组载体pBI121-GmVIT1；

(2)制备携带GmVIT1基因的农杆菌：将步骤(1)得到的重组载体pBI121-GmVIT1转入到农杆菌感受态中培养，得到携带GmVIT1基因的农杆菌；

(3)制备携带GmVIT1基因的植物：培养植物的种子达到苗期，然后对植物进行预培养处理，然后将步骤(2)中得到的农杆菌侵染预培养处理后的植物，然后经过芽诱导、生根诱导和移栽驯化，得到携带GmVIT1基因的植物；

(4)培养携带GmVIT1基因的植物：

进一步地限定，步骤(1)所述重组载体的构建方法为利用限制性内切酶分别酶切载体pMD18T-GmVIT1和pBI121质粒，得到GmVIT1基因的序列片段与pBI121质粒的酶切产物，然后将GmVIT1基因的序列片段与pBI121质粒的酶切产物进行连接反应，连接反应的体系是：5μL的pBI121质粒酶切产物、3μL的GmVIT1基因的序列片段、1μL的10×T4 DNA连接缓冲液和1μL的T4 DNA连接酶，反应温度为16℃，反应时间为12h。

进一步地限定，所述限制性内切酶为Xba I和Sma I。

进一步地限定，步骤(3)中植物的种子达到。

进一步地限定，步骤(3)中农杆菌侵染植物的步骤如下：

1)将携带重组载体pBI121-GmVIT1的农杆菌涂布于含有卡那霉素、链霉素和利福平的YEB固体培养基上，在28℃条件下，培养48h；

2)利用1/2MS液体培养基重悬步骤1)得到的农杆菌的菌落，得到农杆菌的菌液，再用1/2MS将菌液稀释至OD600值为0.4-0.6；

3)取植物叶片，在步骤2)得到的农杆菌的菌液中侵染6-7min，将植物叶片取出放置于无菌滤纸上，吸去附着的菌液，放置于MS1培养基上，在黑暗条件下培养2天。