[发明专利]基于微生物发酵生产畜牧水产用含葡萄糖氧化酶功能型活性肽粉的方法

说明书

本发明涉及基于微生物发酵生产畜牧水产用含葡萄糖氧化酶活性肽粉的方法。以豆粕、麦麸皮、玉米蛋白粉为发酵原料，以特异青霉为出发菌株，通过试管种子、扁平固体种子扩繁、一吨种子罐生产液体种子；以枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌分别为出发菌株，通过试管种子、摇瓶液体种子扩繁；再将产生葡萄糖氧化酶的特异青霉种子液和产生活性肽的枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌种子液，与按顺序已混合好的发酵原料，按比例再均匀混合，放置到塑料吨袋中，插入通气管，联接无菌无油通气泵，经过好氧‑厌氧‑好氧‑厌氧的交替发酵，再经烘干、粉碎、过筛、检测等步骤，得到利用微生物发酵方法生产畜牧水产用含葡萄氧化酶功能型活性肽粉。

技术领域

本发明涉及微生物液体发酵、微生物固体发酵和生物饲料添加剂技术领域。特别涉及到基于微生物发酵生产畜牧水产用含葡萄糖氧化酶功能型活性肽粉的方法。

背景技术

生物活性肽是指能够调节生物机体生命活动或者某些生理活性作用的一类肽的总称。生物活性肽大多是非活性状态，存在于蛋白质中，当被酶解成适当的长度时，它们的生物活性才会表现出来。现在主要通过蛋白酶水解和微生物发酵的生产工艺生产生物活性肽。活性肽的氨基酸含量丰富、比例均衡，具有很好的营养价值，活性肽中多肽主要集中在5000道尔顿以下，其中3000个道尔顿以下的多肽含量占46％。活性肽没有任何毒付作用，可以增强动物机体免疫功能、缓解疲劳并具有抑菌作用，是新一代功能性的生物肽制剂产品，可以替代单一酶解产品和发酵产品。

葡萄糖氧化酶是从特异青霉菌和蜂蜜中发现的酶，它是一种典型的氧化还原酶，分子量约160000道尔顿的蛋白质，有二个多肽链构成，酶反应的最适pH 5-7,最适温度是30-40℃,反应时葡萄糖脱氢成葡萄糖酸内酯，进一步水解为葡萄糖酸，能定量地生成H₂O₂。葡萄糖氧化酶在动物养殖中的主要作用:1)增加食欲，增加采食量，调解胃肠菌群平衡，清除体内及肠道内致病因子，优化肠道环境，促进饲料的消化吸收。2)增强免疫系统和肝脏功能，降低动物体内药物残留，快速消除霉菌毒素中毒，减少疾病发生。3)可以替代抗生素,与抗生素无配伍禁忌，协同抗生素可增加疗效，加快痊愈。4)可耐高温、耐酸碱、耐挤压，适合于颗粒饲料加工生产。用于预防和治疗沙门氏菌引起的疾病，效果突出，功效优于抗生素，且无抗生素耐药性及残留危害。5)可以显著提高动物产品的产量和品质，且有产品中有防腐保质作用。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，芽孢杆菌属，革兰氏阳性菌，无荚膜，周生鞭毛，能运动。芽孢大，椭圆形或柱状。菌落形态呈白色近似圆形，不透明，表面干燥没有光泽，中间褶皱边缘不整齐呈锯齿状，在显微镜下观察菌体呈杆状，两端钝圆，单个或成对排列，染色均匀位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。能够很好的利用淀粉、柠檬酸盐、丙酸盐。在厌氧条件下、氯化钠含量在10％以下均能生长。生长温度范围在30～55℃，最适温度33℃。pH值范围在5.6～8.8。最适pH值范围在7.6～8.8。主要分布在海洋、江河、湖泊、活性污泥和土壤中。枯草芽孢杆菌具有很好的降解蛋白质的能力，生物好氧型、调整菌群、抑制病菌、生物拮抗等功能，所以在提高动物机体免疫力、增强消化系统酶活性、防病治病和促进生长中起着重要作用。贝莱斯芽孢杆菌菌体繁殖速度快、容易培养，能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶以及多种氨基酸，其芽孢抗逆性强、耐高温、耐酸碱、耐挤压，产品适用范围广泛等特点，并且它能作为模式菌株在生物芯片上进行有效的DNA扩增和蛋白质、氨基酸分离。国内外许多学者研究表明，枯草芽孢杆菌在医药保健、水产养殖、禽畜养殖和生态环保等方面有较高的研究价值和应用价值。