[发明专利]一种联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法及其应用在审
| 申请号： | 202011610754.0 | 申请日： | 2020-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN112626016A | 公开（公告）日： | 2021-04-09 |
| 发明（设计）人： | 魏伟;嵐山芮;刘松 | 申请（专利权）人： | 广州瑞铂茵健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 张泽锋 |
| 地址： | 510000 广东省广州市广州高新技*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 联合 链球菌 制剂 tlr8 激动剂 刺激 扩增 cik 细胞 方法 及其 应用 | ||
1.一种联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法，其特征在于，通过A群链球菌制剂和TLR8激动剂的组合来刺激扩增CIK细胞。
2.根据权利要求1所述的联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)采集血液，分离获得单个核细胞；
(2)向混悬后的单个核细胞悬液中加入350～500U/mL IFN-γ，0.02～2KE/mL A群链球菌制剂和10～30μM TLR8激动剂培养；
(3)培养2天后加入CD3、IL-1α和IL-2激活细胞，进行CIK细胞的诱导培养，即可收获大量、高细胞活性的CIK细胞。
3.根据权利要求2所述的联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法，其特征在于，
步骤(1)中所述的血液为脐血和外周血中的至少一种；
步骤(1)中所述的分离为聚蔗糖-泛影葡糖胺密度梯度离心法分离。
4.根据权利要求2所述的联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法，其特征在于，
步骤(1)中所述的分离获得单个核细胞的方法，具体为：采集新鲜抗凝血50mL，采用聚蔗糖-泛影葡糖胺密度梯度离心法，600g离心30min，吸取中间乳白色单个核细胞层，并用生理盐水洗涤2次，600g低速离心10min后获得单个核细胞。
5.根据权利要求2所述的联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的单个核细胞悬液的浓度为1.8×106～2×106个/mL；
步骤(2)中所述的培养用培养箱培养；
步骤(2)中所述的培养的条件为37℃，5％CO2和饱和湿度的培养箱。
6.根据权利要求2所述的联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法，其特征在于，
步骤(3)中所述的CD3的加入量为100～300ng/mL。
7.根据权利要求2所述的联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法，其特征在于，
步骤(3)中所述的IL-1α的加入量为100～300U/mL。
8.根据权利要求2所述的联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的IL-2的加入量为40～80U/mL。
9.根据权利要求2所述的联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法，其特征在于，
步骤(3)中所述的诱导培养的条件为：于37℃，5％CO2和饱和湿度的培养箱内培养13～15天。
10.权利要求1～9任一所述的联合A群链球菌制剂和TLR8激动剂共刺激扩增CIK细胞的方法在扩增CIK细胞中的应用。
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