[发明专利]一种同时靶向CD19和BCMA的双靶点嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明提供了一种同时靶向CD19和BCMA的双靶点嵌合抗原受体及编码其的核苷酸和其应用。该多核苷酸的序列为含依次连接的靶向CD19的嵌合抗原受体的编码序列、连接肽的编码序列和靶向BCMA的嵌合抗原受体的编码序列的多核苷酸序列或其互补序列。本发明提供的表达同时靶向CD19和BCMA的双靶点嵌合抗原受体中靶向BCMA的CAR结构与靶向CD19的CAR结构完全独立并以只切割肽串联，促使BCMA靶点和CD19靶点对CAR‑T细胞信号传导的作用更独立、更有效，此外，表达该双靶点嵌合抗原受体的T细胞对CD19和BCMA双阳靶细胞更有效的杀伤，防止因靶点丢失导致的疾病进展，提高了治疗CD19和BCMA介导的疾病(特别是多发性骨髓瘤)的潜在疗效。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种同时靶向CD19和BCMA的双靶点嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

多发性骨髓瘤是一种恶性浆细胞疾病，表现为骨髓浆细胞恶性克隆性增生，分泌单克隆免疫球蛋白或其片段(M蛋白)，导致骨骼、肾脏等相关靶器官或组织损伤，常见临床表现为骨痛、贫血、肾功能不全、感染等[N Engl J Med,2011.364(11):p.1046-60.]。目前多发性骨髓瘤为血液系统第二大恶性肿瘤，占血液系统恶性肿瘤的10％，多发病于男性，其发病率随着年龄的增长逐年增高，近几年更是有年轻化的趋势[CA CancerJ Clin,2014.64(1):p.9-29.]。

B细胞成熟抗原(B-cell maturation antigen，BCMA)，又称CD269，由184个氨基酸残基组成，其胞内区含80个氨基酸残基，胞外区序列很短，只有一个糖类识别结构域，为B细胞表面分子。BCMA属于缺少信号肽的I型跨膜信号蛋白，是肿瘤坏死因子受体家族(TNFR)一员，它可分别与B细胞激活因子BAFF或增殖诱导配体(aproliferation induced ligand，APRIL)两种配体相结合[Curr Opin Struct Biol,2004.14(2):p.154-60.]。在正常组织中，BCMA表达于成熟B细胞和浆细胞表面，BCMA基因剔除小鼠免疫系统表现正常，有正常的脾结构，B淋巴细胞的发育正常，但浆细胞数量明显减少，证明BCMA在维持浆细胞的存活中起了重要的作用，其机制主要包括BCMA-BAFF蛋白结合，并上调抗凋亡基因Bcl-2，Mcl-1及Bclw等，维持细胞生长[J Exp Med,2004.199(1):p.91-8.]。同样地，该机制也在骨髓瘤细胞中发挥了功能，对骨髓瘤细胞的恶性增生起了重要的促进作用[Blood,2004.103(8):p.3148-57.]。研究表明，BCMA普遍表达于多发性骨髓瘤细胞系，在多发性骨髓瘤患者中的检测也得到了一致性的结果[Blood,2004.103(2):p.689-94.]。Kochenderfer等在已有报道的基础上，又联合应用Q-PCR、流式细胞术和免疫组化方法深入研究了BCMA的表达特征，确认BCMA在成熟B细胞、浆细胞之外的正常人体组织无表达，且在CD34⁺造血细胞中也无表达[Clin Cancer Res,2013.19(8):p.2048-60.]。结合BCMA表达特征与CD19的高度相似性，以及抗CD19 CAR-T细胞治疗的成功进展，表明BCMA可以作为CAR-T细胞的靶点之一用于多发性骨髓瘤的细胞免疫治疗。