[发明专利]一种提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法

说明书

本发明公开了一种提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，具体包括以下步骤：S1消毒：将选取的蒜瓣进行预处理后再依次经酒精、氯化汞消毒，剥取茎尖顶端0.5‑1.0mm组织即获得外植体，备用；S2培养基配置：配置诱导培养基，待用；S3外植体接种：将所述外植体接入所述诱导培养基中，在无菌培养有光照的条件下进行诱导培养，获得茎尖分生组织苗；S4继代培养且诱导分化：待不定芽长出新的蒜叶，则进行继代培养，诱导不定芽分化和生长，最后分化出芽丛。该方法操作简单，同一种培养基培养和培养条件下，只要不断剥取新叶和损伤刺激茎尖分生组织即可；同时繁殖系数高，一般可达4～5以上；且一步到位诱导出大量的不定芽，时间短，效率高，有效地降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及植物组培技术领域，具体涉及一种提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法。

背景技术

组培技术是解决农作物脱毒复壮和快繁苗生产最主要的技术。

大蒜为百合科葱属多年生草本植物，是非常重要的香悻类蔬菜和调味品，大蒜在生产上采用鳞茎无性繁殖，在长期的无性繁殖过程中，易感染多种病毒，目前发现的危害大蒜的病毒主要有大蒜花叶病毒、洋葱黄矮病毒、大蒜潜隐病毒、大蒜褪绿条斑病毒等，田间发病率有的高达100％，出现鳞茎退化现象严重，导致产量下降、品质变劣，严重影响大蒜生产。通过剥取茎尖生长点、根尖、茎盘、花序轴、总苞等未受病毒感染的组织进行培养，培育出脱毒大蒜种苗是目前防治病毒病的最有效途径。

由于大蒜组织通过脱分化形成愈伤组织，然后再分化建立植株的间接器官发生途径存在遗传变异大，易出现玻璃化苗等情况，很少用于脱毒苗的生产。绝大多数大蒜脱毒研究都采用由外植体直接再生植株的直接器官发生途径。但是这一途径在大蒜组培过程中出现不定芽诱导低、繁殖系数低，成本较高的缺陷，很难满足脱毒苗数量上的需求。因此如何提高不定芽的诱导率和不定芽的繁殖系数成为大蒜脱毒苗产业化的关键。

因此，有必要开发一种提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，该方法操作简单、繁殖系数高且成本低。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，该方法操作简单、繁殖系数高且成本低。

为解决以上问题，本发明采用的技术方案是：提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，具体包括以下步骤：

S1消毒：将选取的蒜瓣进行预处理后再依次经酒精、氯化汞消毒备用，准备剥取大蒜茎尖分生组织；

S2培养基配置：配置诱导培养基，待用；

S3取消毒过的蒜瓣在解剖镜下剥取茎尖顶端0.5～1mm的部分即为茎尖分生组织，作为外植体接入所述特定的诱导培养基中，在无菌培养有光照的条件下进行诱导培养，目的是通过直接器官发生途径诱导不定芽分化；

S4继代培养且诱导分化：待茎尖分生组织经诱导培养长出新的蒜叶，蒜叶高度达到10cm时，将新的蒜叶沿茎基部剥除，将假茎1～2cm以上部分剪掉，假茎的两侧用手术刀轻轻划开，刺激分生组织，然后接入分化培养基进行继代培养；每7～8天重复继代培养，4～5次后则能诱导分化出不定芽并生长，最后形成芽丛。

采用上述技术方案，选取大蒜品种的蒜头，剥出蒜瓣，在50％多菌灵可湿性粉剂500倍稀释的溶液中浸泡6～12h，再用自来水冲洗1～3h，后晾干等预处理，再依次采用75％酒精溶液、和0.1％HgCl溶液进行浸泡消毒。取消毒过的蒜瓣在解剖镜下剥取茎尖顶端0.5-1mm的部分即为茎尖分生组织，并作为外植体接入上述的诱导培养基中，诱导培养出新叶，再通过剥叶损伤和刺激分生组织，诱导出数量众多的不定芽的大蒜组织苗培养方法。采用了新的激素配比培养基配方，结合不断剥取新叶和划伤刺激叶原基四周的分生组织等物理方法，诱导数量众多的不定芽形成；普通的茎尖分生组织方法只能分化出1～3株不定芽，通过这一方法可以直接分化出2个芽丛，8～10个不定芽。