[发明专利]一种提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法

权利要求书

1.一种提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

S1消毒：将选取的蒜瓣进行预处理后再依次经酒精、氯化汞消毒备用，准备剥取大蒜茎尖分生组织；

S2培养基配置：配置诱导培养基，待用；

S3取消毒过的蒜瓣在解剖镜下剥取茎尖顶端0.5～1mm的部分即为茎尖分生组织，作为外植体接入所述特定的诱导培养基中，在无菌培养有光照的条件下进行诱导培养，目的是通过直接器官发生途径诱导不定芽分化；

S4继代培养且诱导分化：待茎尖分生组织经诱导培养长出新的蒜叶，蒜叶高度达到10cm时，将新的蒜叶沿茎基部剥除，将假茎1～2cm以上部分剪掉，假茎的两侧用手术刀轻轻划开，刺激分生组织，然后接入分化培养基进行继代培养；每7～8天重复继代培养，4～5次后则能诱导分化出不定芽并生长，最后形成芽丛。

2.根据权利要求1所述的提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，其特征在于，还包括S5芽丛后续培养：待分化出的不定芽数量达到原不定芽数量的4～5倍时，切断叶片，以2～3个芽点为一丛进行转接至诱导培养基中进行增殖培养，进入快繁阶段；

或将所述步骤S4中获得芽丛接种入生根培养基进行诱导生根培养，获得生根苗。上述生根培养基配方将另行申报专利，基础培养基相同，主要是调整激素和部分营养成分的比例；或接种入微鳞茎培养基中进行微鳞茎的诱导，获得微鳞茎。诱导微鳞茎培养基也是通过调整激素和营养成分比例而达成；再将生根苗或微鳞茎经过驯化后种植到大田，获得大蒜苗或大蒜鳞茎。

3.根据权利要求1所述的提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，其特征在于，

所述步骤S1具体为：

S11预处理：选取脱毒品种的蒜头，剥出蒜瓣，在50％多菌灵可湿性粉剂500倍稀释的溶液中浸泡6～12h，再用自来水冲洗1～3h，后晾干后备用；

S12多菌灵浸泡后蒜瓣的表面消毒：将采用的蒜瓣放入75％酒精浸泡45～70s，然后取出用无菌水冲洗4～5遍，再投入0.1％的升汞(HgCl)消毒溶液内浸泡20～40min，取出后放入无菌水中，同时采用无菌水流水冲洗5～8遍，获得无菌无毒的蒜瓣。

4.根据权利要求3所述的提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，其特征在于，所述步骤S2中培养基的配方为：MS+6BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+3％蔗糖，将配方的原材料按比例称取混合，加入0.65％琼脂粉后煮沸再将其pH调到6.0～6.5，并分装到多个试管中，密封进行高压灭菌消毒，待冷却凝固后，待用。

5.根据权利要求4所述的提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，其特征在于，所述步骤S3具体为：采用解剖镜和解剖针将蒜瓣芽的外层叶片组织一层层剥掉，直至解剖针解剖到最小的叶原基，切下茎尖(生长点顶端0.5mm～1.0mm)接种于步骤S2配置的诱导培养基中进行诱导培养。

6.根据权利要求5所述的提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，其特征在于，所述步骤S4具体为：

S41：待经诱导培养后的获得的茎尖分生组织在45～60d后生长出至少10cm高的新叶，获得大蒜组培苗；

S42：将获得的大蒜组培苗进行继代培养，当新叶长到10cm高时，将所述大蒜组培苗转接一次，先从基部切除大蒜组培苗的新叶，仅保留1～2cm高的假茎即大蒜茎杆，并在假茎的两侧各划两刀，刺激茎尖分生组织的分化和生长，采用相同的方法连续转接4次，第5次将大蒜组培苗的叶片剥除后将假茎纵向一剖为二，作为二块分生组织接入分化培养基进行继代培养诱导不定芽；

S43：待10～15d后，则在假茎的基部分化出不定芽，即获得丛芽，芽的数量为4-5个，在30～35天培养后，丛芽可以进行增殖培养。

7.根据权利要求5所述的提高大蒜生长点分化不定芽数量的组培方法，其特征在于，所述步骤S3采用解剖针进行一层一层解剖时对每解剖一层则对解剖针采用95％酒精和火焰灼烧进行消毒，并待解剖针冷却后进行解剖操作；所述步骤S3中进行诱导培养的条件为：在25℃的温度下进行光照时间14～16h/d，光照强度为2000Lux，在培养试管内湿度恒定在95％以上。