[发明专利]一种基于MALDI-TOF-MS体外筛选CDKs家族蛋白激酶抑制剂的方法

权利要求书

1.一种基于MALDI-TOF-MS体外筛选CDKs家族蛋白激酶抑制剂的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)制备CDKs体外磷酸激酶实验缓冲液(KRB)的母液：所述母液由pH值＝7.6的Hepes溶液，KCl溶液，MgCl₂溶液，DTT溶液，β-glycerol phosphate溶液和Na₃VO₄溶液组成；

(2)进行体外磷酸激酶反应：将待测药物样品与步骤(1)中所制备的CDKs体外磷酸激酶实验缓冲液(KRB)的母液，2R底物肽段，CDKs家族蛋白激酶和ATP一起进行水浴孵育，终止反应后将所得产物除盐后即可制备得到质谱分析样品；其中，所述的CDKs家族蛋白激酶为CDK9；所述2R底物肽段为PSYSPTSPSYSPT；

(3)MALDI-TOF-MS检测：将步骤(2)中制得的样品与基质混合后点样，等完全干燥后即可进行MALDI-TOF-MS测试，MALDI-TOF-MS模式选择适合生物大分子的线性模式和正电荷模式，分子量扫描范围设为500～3000kDa，激光器能量为12-36％，通过比较样品中磷酸化的短肽和未磷酸化的短肽离子峰的峰面积来即可判断待测药物抑制CDKs的体外活性大小。

2.根据权利要求1所述的基于MALDI-TOF-MS体外筛选CDKs家族蛋白激酶抑制剂的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的水浴孵育条件为：水浴温度30℃，水浴时间10-60min。

3.根据权利要求1所述的基于MALDI-TOF-MS体外筛选CDKs家族蛋白激酶抑制剂的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的基质选自SA,DHB或HCCA中的一种。