[发明专利]一种甜菜碱磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种甜菜碱磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括：第一试剂、第二试剂、第三试剂和第四试剂；

所述第一试剂为甜菜碱衍生物-碱性磷酸酶连接物，所述第二试剂为甜菜碱抗体-磁微粒子工作液，所述第三试剂为清洗缓冲液，所述第四试剂为酶促发光底物液；

其中，所述第一试剂的制备步骤包括：

将甜菜碱衍生物溶解于二甲基亚砜中，并加入三丙胺和氯甲酸异丁酯进行活化反应，制备得活化的甜菜碱衍生物溶液；

量取100~1000μL的所述活化的甜菜碱衍生物溶液，加入10~100mg的碱性磷酸酶室温活化1小时，提纯后获得所述第一试剂；

其中，所述第二试剂的制备步骤包括：

配制甜菜碱抗体溶液和生物素-N-琥珀酰亚胺基酯溶液，混合所述甜菜碱抗体溶液和生物素-N-琥珀酰亚胺基酯溶液，室温反应1小时后进行提纯，制得生物素标记的甜菜碱抗体；

将包被了链霉亲和素的磁微粒子用PBS缓冲液配制成10~100mg/ml的吸附溶液，向所述吸附溶液中加入所述生物素标记的甜菜碱抗体进行吸附反应，然后洗去未结合的其他物质，获得甜菜碱抗体-生物素-链霉亲和素-磁微粒子，用PBS缓冲液配制得所述第二试剂；

或者，所述的第二试剂的制备步骤包括：

用硼酸盐缓冲液稀释甜菜碱抗体配制成1mg/ml的甜菜碱抗体溶液，将甲苯磺酰基磁珠配制成20mg/ml的甲苯磺酰基磁珠吸附工作液；

混合所述甜菜碱抗体溶液和所述甲苯磺酰基磁珠吸附工作液，并加入(NH₄)₂SO₄ 溶液反应，反应完成后洗去未结合的其他物质，获得甜菜碱抗体包被的甲苯磺酰基磁珠，用PBS缓冲液将所述甜菜碱抗体包被的甲苯磺酰基磁珠配制成第二试剂。

2.一种根据 权利要求1所述的甜菜碱磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

步骤一、通过混合酸酐法制备所述的第一试剂，所述第一试剂为甜菜碱衍生物-碱性磷酸酶连接物，其中，通过混合酸酐法制备所述第一试剂的制备步骤包括：

将甜菜碱衍生物溶解于二甲基亚砜中，并加入三丙胺和氯甲酸异丁酯进行活化反应，制备得活化的甜菜碱衍生物溶液；

量取100~1000μL的所述活化的甜菜碱衍生物溶液，加入10~100mg的碱性磷酸酶室温活化1小时，提纯后获得所述第一试剂；

步骤二、通过甜菜碱抗体与磁微粒子反应制备第二试剂，所述第二试剂为甜菜碱抗体-磁微粒子工作液，其中，所述甜菜碱抗体与磁微粒子反应制备第二试剂的制备步骤包括：

配制甜菜碱抗体溶液和生物素-N-琥珀酰亚胺基酯溶液，混合所述甜菜碱抗体溶液和生物素-N-琥珀酰亚胺基酯溶液，室温反应1小时后进行提纯，制得生物素标记的甜菜碱抗体；

将包被了链霉亲和素的磁微粒子用PBS缓冲液配制成10~100mg/ml的吸附溶液，向所述吸附溶液中加入所述生物素标记的甜菜碱抗体进行吸附反应，然后洗去未结合的其他物质，获得甜菜碱抗体-生物素-链霉亲和素-磁微粒子，用PBS缓冲液配制得所述第二试剂；

或者，所述第二试剂的制备步骤包括：

用硼酸盐缓冲液稀释甜菜碱抗体配制成1mg/ml的甜菜碱抗体溶液，将甲苯磺酰基磁珠配制成20mg/ml的甲苯磺酰基磁珠吸附工作液；

混合所述甜菜碱抗体溶液和甲苯磺酰基磁珠吸附工作液，并加入(NH₄)₂SO₄ 溶液反应，反应完成后洗去未结合的其他物质，获得甜菜碱抗体包被的甲苯磺酰基磁珠，用PBS缓冲液将所述甜菜碱抗体包被的甲苯磺酰基磁珠配制成第二试剂；

步骤三、将表面活性剂与PBS缓冲液、吐温-20混合制备第三试剂，所述第三试剂为清洗缓冲液；

步骤四、将金刚烷AMPPD底物液用PBS缓冲液进行稀释，制得酶促发光底物液，第四试剂为酶促发光底物液。

3.根据权利要求2所述的甜菜碱磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤二中的用PBS缓冲液配制的所述第二试剂或者用PBS缓冲液将甜菜碱抗体包被的甲苯磺酰基磁珠配制成第二试剂中的所述PBS缓冲液为0.02M、pH＝7.4的PBS缓冲液，所述PBS缓冲液还含有0.5%的牛血清白蛋白、0.9%的氯化钠、0.1%的吐温-20和0.05%的生物防腐剂Proclin300。