[发明专利]基于水疱性口炎病毒载体的重组新型冠状病毒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种重组水疱性口炎病毒，为将水疱性口炎病毒的糖蛋白G替换为囊膜蛋白S后得到的病毒；其特征在于：所述重组水疱性口炎病毒为如下1）或2）或3）：

1）将水疱性口炎病毒的糖蛋白G替换为2019-nCoV的囊膜蛋白S后得到的病毒；所述囊膜蛋白S由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区、囊膜蛋白S跨膜区和囊膜蛋白S胞内区组成；

2）将水疱性口炎病毒的糖蛋白G替换为由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区和SARS-CoV的囊膜蛋白S跨膜区和胞内区嵌合而成的囊膜蛋白S后得到的病毒；

3）将水疱性口炎病毒的糖蛋白G替换为由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区和水疱性口炎病毒的糖蛋白G跨膜区和胞内区嵌合而成的囊膜蛋白S后得到的病毒。

2.根据权利要求1所述的重组水疱性口炎病毒，其特征在于：

所述2019-nCoV的囊膜蛋白S的氨基酸序列为序列表中的序列2；

或，所述由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区和SARS-CoV的囊膜蛋白S跨膜区和胞内区嵌合而成的囊膜蛋白S的氨基酸序列为序列表中的序列4；

或，所述由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区和水疱性口炎病毒的糖蛋白G跨膜区和胞内区嵌合而成的囊膜蛋白S的氨基酸序列为序列表中的序列6。

3.根据权利要求2所述的重组水疱性口炎病毒，其特征在于：所述1）中，所述重组水疱性口炎病毒为将水疱性口炎病毒基因组序列中的糖蛋白G的编码基因序列替换为2019-nCoV的囊膜蛋白S的编码基因序列后得到的病毒；

所述2）中，所述重组水疱性口炎病毒为将水疱性口炎病毒基因组序列中的糖蛋白G的编码基因序列替换为由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区和SARS-CoV的囊膜蛋白S跨膜区和胞内区嵌合而成的囊膜蛋白S的编码基因序列后得到的病毒；

所述3）中，所述重组水疱性口炎病毒为将水疱性口炎病毒基因组序列中的糖蛋白G的编码基因序列替换为由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区和水疱性口炎病毒的糖蛋白G跨膜区和胞内区嵌合而成的囊膜蛋白S的编码基因序列后得到的病毒。

4.一种重组水疱性口炎病毒，是将重组病毒载体转染病毒包装细胞，然后进行细胞培养后得到的；所述重组病毒载体为如下A）或B）或C）或D）：

A）将水疱性口炎病毒载体中的水疱性口炎病毒基因组序列中的糖蛋白G的编码基因序列替换为2019-nCoV的囊膜蛋白S的编码基因序列后得到的载体；所述囊膜蛋白S由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区、囊膜蛋白S跨膜区和囊膜蛋白S胞内区组成；

B）将水疱性口炎病毒载体中的水疱性口炎病毒基因组序列中的糖蛋白G的编码基因序列替换为由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区和SARS-CoV的囊膜蛋白S跨膜区和胞内区嵌合而成的囊膜蛋白S的编码基因序列后得到的载体；

C）将水疱性口炎病毒载体中的水疱性口炎病毒基因组序列中的糖蛋白G的编码基因序列替换为由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区和水疱性口炎病毒的糖蛋白G跨膜区和胞内区嵌合而成的囊膜蛋白S的编码基因序列后得到的载体；

D）在A）或B）或C）所述的重组病毒载体中插入报告基因后得到的载体。

5.根据权利要求3或4所述的重组水疱性口炎病毒，其特征在于：所述2019-nCoV的囊膜蛋白S的编码基因序列为序列表中的序列1；

或，所述由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区和SARS-CoV的囊膜蛋白S跨膜区和胞内区嵌合而成的囊膜蛋白S的编码基因序列为序列表中的序列3；

或，所述由2019-nCoV的囊膜蛋白S胞外区和水疱性口炎病毒的糖蛋白G跨膜区和胞内区嵌合而成的囊膜蛋白S的编码基因序列为序列表中的序列5；

或，所述报告基因为GFP基因。

6.根据权利要求3或4所述的重组水疱性口炎病毒，其特征在于：所述2019-nCoV为2019-nCoV Wuhan-Hu-1毒株；

或，所述SARS-CoV为SARS-CoV BJ01毒株；

或，所述水疱性口炎病毒为水疱性口炎病毒Indiana毒株。