[发明专利]茴香霉素的制备方法、茴香霉素的检测方法及抑菌应用

权利要求书

1.一种茴香霉素的制备方法，其特征在于，包括：

取小白链霉菌CK-15的菌株种子液接种于种子培养基，28℃、220 rpm 培养 24h后，按照5%接种量转接至100 ml发酵培养基中，30℃发酵5 d，将得到的发酵液经离心处理，收集第一上清液；

将所述第一上清液的pH调至9.0，用与所述上清液等体积的乙酸乙酯萃取第一有机相；

用与所述第一有机相等体积的pH为 2.0的酸水对所述第一有机相反向萃取，收集水相并将所述水相的pH调至9.0；

用与所述水相等体积的乙酸乙酯萃取，收集第二有机相并旋干。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括：

将所述第二有机相通过大孔吸附树脂HP-20预处理，依次通过ODS、Sephadex LH-20 层析，采用乙酸乙酯与甲醇比例从20:1到1:20进行梯度洗脱，去所述第二有机相中的杂质，获得茴香霉素粗品；

将所述茴香霉素粗品用甲醇溶解，经滤膜过滤后，采用HPLC收集茴香霉素出现峰值时的液相，将所述液相在60℃以下减压浓缩干燥，冷冻干燥后得到淡黄色的茴香霉素粉末。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述种子培养基采用2g葡萄糖、0.6g蛋白胨、0.6g酵母粉、1g 的NaCl和100ml蒸馏水混合而成，并在121℃下灭菌30min。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基采用10 g玉米粉、20g可溶性淀粉、10 g黄豆饼粉、0.2g的KH₂PO₄、3g的NaCl、3g的NH₄Cl、4g的CaCO₃、1L的蒸馏水混合而成，且pH=7.0。

5.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，所述菌株种子液的制备方法为：切取1cm×1cm菌块，接种于所述种子培养基中，在28℃、220 rpm培养 24h，获得种子液。