[发明专利]能够稳定表达TreT的重组ST细胞及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 202011529269.0 | 申请日： | 2020-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN114958757B | 公开（公告）日： | 2023-10-24 |
| 发明（设计）人： | 徐悦;鲍熹;冯磊;陈丽;恽君雯 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/65;C12N7/02;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京太兆天元知识产权代理有限责任公司 11108 | 代理人： | 张洪年 |
| 地址： | 210014 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 能够 稳定 表达 tret 重组 st 细胞 及其 构建 方法 应用 | ||
1.能够稳定表达海藻糖转运蛋白(TreT)的重组ST细胞(ST-Sus-Tret-1)，其特征在于：该细胞于2020年11月6日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21010。
2.根据权利要求1所述的重组ST细胞，其特征在于：所述重组ST细胞中含有如SEQ ID:1所示的海藻糖转运蛋白编码序列Tret-1。
3.权利要求1所述的重组ST细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)构建含有海藻糖转运蛋白编码序列的载体pCMV-Tret-1；
(2)将转染复合物滴加入ST细胞培养液中，转染，并利用G418筛选抗性中稳定持续生长的重组ST-Sus-Tret-1细胞。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：所述ST细胞为单细胞悬浮生长的ST-Sus细胞。
5.根据权利要求3或4所述的构建方法，其特征在于：所述步骤(2)中利用G418进行两轮筛选，第一轮的筛选浓度为500ug/ml，第二轮的筛选浓度为1000ug/ml；优选的，每一轮均采用20代连续筛选。
6.权利要求1所述的重组ST细胞(ST-Sus-Tret-1)在增殖病毒中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述病毒为流行性腹泻病毒(PEDV)、增殖猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)。
8.用于增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单细胞克隆ST-Sus-Tret-1-9E2。
9.用于增殖猪瘟病毒(CSFV)的单细胞克隆ST-Sus-Tret-1-4C7。
10.用于增殖伪狂犬病病毒(PRV)的单细胞克隆ST-Sus-Tret-1-3D3。
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