[发明专利]检测PIEZO1基因突变的引物、试剂盒和方法

说明书

本发明涉及一种检测PIEZO1基因突变的引物和方法，其包括扩增PIEZO1基因外显子序列的引物；采用Sanger测序技术和测序引物。本发明可快速地将PIEZO1基因外显子的突变检测出来。本发明检测结果准确，可以辅助诊断遗传性口型红细胞增多症，对疾病的诊断有重要的参考意义。

技术领域

本发明属于分子检测领域，特别涉及一种检测PIEZO1基因突变的引物、试剂盒和检测方法。

背景技术

遗传性口型红细胞增多症(hereditary stomatocytosis，HSt)是一组以红细胞膜的离子渗透功能异常和成熟红细胞形态改变为特征的罕见遗传性溶血性贫血，其血液中出现不同比例的口形红细胞，口形红细胞是以宽的横向裂口或口状为特征的红细胞，可见于各种获得性遗传性疾病。在遗传性口形红细胞增多症中，口形红细胞的比例大于5％(正常小于4％)，最高可达10％～50％。

遗传性口型红细胞增多症包括脱水性HSt，又称遗传性干瘪细胞增多症(hereditary xerocytosis，Hx)和水化性HSt，Hx是HSt中最常见的亚型。Hx诊断主要基于临床特征和外周血红细胞形态，以往由于低发病率和临床表型异质性常致该病诊断延误。2018年Kaufman等报道，近年美国Hx发病率为1/8000，高于经典估测发病率(1/5000)约6倍，诊断时中位年龄约51岁。Hst临床表型异质性强而诊断手段有限，容易漏诊或误诊，以致施以不恰当脾切除治疗，这会增加严重的血栓风险。

PIEZO1基因是Hx的致病基因之一。PIEZO1基因定位于16q23q24，包含51个外显子，该基因编码的PIEZO1蛋白，主要传导单价离子(如K⁺、Na⁺、Li⁺、Cs⁺)和二价离子(如Ba²⁺、ca²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺)。PIEZO1蛋白是迄今红细胞膜上最大的离子通道之一，还调控着三磷酸腺苷(ATP)从红细胞释放。PIEZO1基因突变，可造成PIEZO1蛋白延迟失活，离子通道开放状态延长，引发红细胞胞内过量的钾离子外泄和水分流失，继而使得红细胞形态发生改变。据悉，目前已发现的与Hx相关的PIEZO1基因突变共计17种，15种(88.2％)为错义突变。29个独立家系(共133例患者)的Hx患者与PIEZO1基因突变相关。在该133例患者中，以c.7367GA、c.7463GA、c.7479-7484dup三种致病性基因突变最为常见。目前已报道的突变位点对应的氨基酸改变多位于PIEZO1蛋白第598位氨基酸至第1358位氨基酸以及第2000位氨基酸至胞浆C末端。

PIEZO1突变分析对遗传性口型红细胞增多症遗传咨询及产前诊断具有重要意义，HSt的遗传方式为常染色体显性遗传。所以，先证者如致病基因明确，父母决定妊娠应及时进行相关遗传咨询，在妊娠早期阶段进行产前分子诊断，一旦出现异常结果，需要明确是否可治疗，愈后如何等等，采取切实可行的诊治措施。最大限度减少异常胎儿的出生，提高新生儿人口素质。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测PIEZO1基因突变的试剂盒，采用PCR技术，可用于快速检测患者体内PIEZO1基因的突变情况。

检测PIEZO1基因突变的引物，其特征在于，包括扩增PIEZO1基因的引物，

其碱基序列为：

进一步地，所述引物还包括检测PIEZO1基因的测序引物，其碱基序列为：

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13R：AACAGCTATGACCATG

进一步地，所述引物扩增对应外显子为：